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1、中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin2008Jan;24(1):11～4·11·血管生成实验模型研究进展11,211吴家明,陆茵,郜明,张伟伟(1.南京中医药大学中医药研究院,江苏南京210029;2.江苏省方剂研究重点实验室,江苏南京210029)中国图书分类号:R205;R332;R3632332;R364131.1.2细胞周期分析近年来有报道通过细胞周期分析来文献标识码:A文章编号:1001-1978(2008)01-0011-04评价药物对细胞增殖的影响,细胞短时间暴露到溴脱氧尿苷摘要:抗血管生成已经成为治疗肿瘤转移、糖尿病视
2、网膜病(BrdU)中可以促使BrdU参入细胞DNA中。碘化丙啶(PI)变、风湿性关节炎等疾病的重要策略之一。血管生成模型作染色后测定细胞的总DNA量,再用荧光激活细胞分析仪测[4]为一种研究工具在探讨血管形成机制、发现促进或抑制血管定细胞中BrdU和PI的量可得出细胞周期信息。但实验生成药物等研究中发挥十分积极的作用。如何寻找适合的用的内皮细胞处于增殖状态,与体内静止状态的内皮细胞是血管生成模型是研究人员在研究中常遇到的问题。该文就不同的,实验结果与体内还是存在一定差异。主要常用模型做较全面的介绍,并对其优缺点进行评价。1.2内皮细胞迁移实验(cellmigrationa
3、ssay)常用迁移模型有两种:①细胞损伤模型:在培养血管内皮细胞的培养关键词:血管生成;模型皿上用刀片划出#形区,经PBS洗涤后再用含011%明胶的血管生成(angiogenesis)是指在原有的毛细血管和(或)MEM培养20h,细胞用甲醇固定,Giemsa染色。在光镜下计微静脉基础上通过血管内皮细胞的迁移和增殖,从已存在的数从损伤边缘迁移出的细胞数,需要注意的是划出的损伤区血管处以芽生或非芽生(套迭)形式形成新的、以毛细血管域一定要精确。②Boyden室模型,Boyden室由两层组成,两[1]为主的血管系统过程。血管生成是许多促进或抑制血管层之间为胶原包被的多孔的多聚碳
4、酸盐滤膜;血管内皮细胞[2]生成的分子参与调节的一个平衡过程。血管生成过多与放于上层,同时加入待测药物,共同培养6h后,除去上层的[3]肿瘤、糖尿病性视网膜病变等疾病有关,抑制血管生成已细胞,下层细胞用甲醇固定,HE染色,光镜下计算下层的血经成为治疗这些疾病的重要策略。因此寻找血管生成抑制[5]管内皮细胞数。龙淼云等采用本模型研究证明了血管生剂成为研究热点。血管生成研究需借助血管生成模型进行,成抑制因子arresten对huvec迁移有抑制作用。Boyden室模血管形成的许多过程都可以在血管生成模型中模拟完成,包型优点在于它对药物浓度梯度差异很敏感。但对实验技术括内皮细胞
5、增殖、迁移、毛细血管网状结构的形成等。本文要求较高且计数方法不同可能会造成统计结果误差较大。就常用体内、体外及整体模型进行综述。因此有必要建立一个严格的计数标准以减少因方法不同产1体外模型生的误差。体外模型主要分为细胞水平及组织学水平两类,常用的1.3小管形成实验(tubeformationassay)小管形成实验体外模型有以下4种。能模拟人体内毛细血管生成的过程,包括内皮细胞出芽增殖1.1内皮细胞增殖实验(cellproliferationassay)内皮细和毛细血管网结构形成等步骤,接近人体内血管生成的实际胞活化增殖是血管生成的起始阶段。目前主要有两种测定过程。内皮细
6、胞在基质胶、纤维蛋白胶、胶原等基质上培养细胞增殖的方法即净细胞数测定和细胞周期分析。时能形成网状结构。用电子显微镜来分析小管间的紧密连1.1.1净细胞数测定MTT法(四甲基偶氮唑比色法)是[6]接,从而定量血管生成情况。需要指出的是似乎所有的内测定活细胞数的化学定量方法,操作简便,价格低廉。但它皮细胞都能在细胞外基质上形成管状结构,有些非内皮细胞不适合测定对细胞代谢有影响的药物,因为这类药物能影响[7]也能在基质胶上形成管腔结构。实验一般采用24孔培养MTT测定的活细胞数。另外通过胸腺嘧啶核苷参入法测定板,但它底面积大,Matrigel用量多,计数区域大只能随机选DNA合
7、成来测定细胞增殖能力。抑制细胞增殖可能是由于[8]择几个典型区域且数据分析耗时长。Sanz等采用384孔药物的抑制作用,也可能是药物的毒性作用引起。因此,这和1536孔培养板培养可节约胶的用量,借助计算机可以计种方法常需要结合细胞凋亡实验的数据才可以更好地评价算整个孔的小管及小管之间的连接数及小管的长度和面积。药物对细胞增殖的影响。改进方法后减少了原来分析困难及重现性差的缺点。1.4大鼠动脉环实验(rataorticringassay)1990年Nic2收稿日期:2007-09-21,修回日期:2007-11-01基金项目:国
