怀地黄多糖化学研究

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1、怀地黄多糖化学研究更新日期：2011-01-23点击：杨云　苗明三　王浴铭　　提要　采用DEAE-Cellulose及SephadexG-200柱层析，从怀地黄水提取物中分离出一多糖RG，醋酸纤维素薄膜电泳，高效凝胶渗透色谱证实，RG为单一组份，薄层层析和气相色谱分析表明，该多糖由葡萄糖、半乳糖、鼠李糖和甘露糖组成。　　关键词　怀地黄；多糖；化学研究ChemicalStudyonPolysaccharideConstituentofRehmanniaGlutinosaLibosch.F.HueiChinensisHsiaoYangYun,MiaoMingsan,WangYu

2、mingHenanCollegeofTCM,Zhengzhou450003　　Abstract　ThispaperreportedthechemicalstudyonpolysaccarideconstituentofRehmanniaGlutinosaLibosch.f.HueichinensisHsiao.FromthewaterextractsofthistraditionalChinesemedicine,apolysaccaride,namedRG,wasisolatedbyDEAE-celluloseandSephadex-200columnchromatogr

3、aphy.ThepolysaccharidewashomogeneousjudgedbyHPGPCandacetatecellulosefilmelectrophoresis.TLCandGCshowedthatRGwascomposedofglucose,galactose,rhamnoseandmannose.　　Keywords　RehmanniaGlutinosa;Polysaccharide;Chemicalstudy　　怀地黄(RehmanniaglutinosaLibosch.f.hueiChinensisHsiao)系玄参科地黄属植物，为常用中药，也是河南地

4、道药材之一。其炮制品熟地黄具有滋阴补肾、补血调经的功效，主要用于腰膝酸软、头晕耳鸣、肾虚等。在寻找地黄补益活性成分的研究中，我们发现其多糖具有提高正常小鼠淋巴细胞转化率，增重小鼠免疫器官(肝、脾)以及促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能等作用。因此，对多糖部分进行了进一步的分离纯化及初步化学研究。　　1　仪器、药品及试剂　　GPC测定仪为HP-1090M(带GPC软件)，示差折光仪为HP-1037ARI，柱为μ-BondagelE-1000，均为美国惠普公司产品。GC仪为HP5890Ⅱ型，OV-17弹性石英毛细管柱，3396积分仪。DEAE-Cellulose为whatman产品。

5、SephadexG-200为pharmacia产品。测定分子量所用标准品ShodexStandardPullulanP-82系列为SHOWADENICOK.K公司产品。醋酸纤维素薄膜为浙江黄岩曙光化工厂产品。各种单糖标准品为Merck出品。除乙醇为工业级外，其余溶剂均为分析纯。　　2　多糖的提取分离　　熟地，粉碎，乙醇渗漉至流出液浅黄色为止，药渣挥去乙醇，热水提取3次，滤液浓缩，加1%鞣酸至不再产生沉淀，煮沸15min，加入20%活性炭搅拌10min，抽滤，滤液逆向流水透析3d，浓缩，调含醇量80%，滤取沉淀，以无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤，P2O5干燥器干燥，得粗多糖。　

6、　取粗多糖进行DEAE-Cellulose柱层析，依次以H2O、0～2mol/LNaCl溶液梯度洗脱，分部收集，苯酚－硫酸法检测，合并单一峰位，再经SephadexG-200反复柱层析，洗脱剂及检测方法同前，结果得到一个单一组份，经蒸馏水透析，浓缩，醇沉，干燥，得地黄多糖RG。　　3　纯度及分子量测定　　3.1　纯度测定　　3.1.1　醋酸纤维素膜电泳：醋酸纤维素膜(3cm×10cm)，硼砂缓冲液(pH9.2)。电压340V，时间30min，0.5%阿利新蓝的3%醋酸液显色，RG呈单一黄色色带。　　3.1.2　GPC测定：取RG加水溶解，滤过，进样，流动相0.02%NaN2

7、水溶液，流速0.5ml/min，示差折光检测，结果RG洗脱峰为单一对称峰，说明为均一组份，见图1。图1　TheGPCElutionPatternofRG　　3.2　分子量测定：先以GPC测定各多糖标准品ShodexStandardPullulanP-82系列(P-200，P-100，P-50，P-10，P-5)及蓝色5组：即正常对照组、缺血模型组、消栓口服液组及熄风康高、低剂葡聚糖的保留时间，以logMW对保留时间做图得标准曲线，同法测出RG保留时间，从标准曲线上求得分子量为3.57×104。　　4　完全酸水解及糖