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1、摘要人白细胞介素13(interleukin13,IL-13)是近年来发现的一种细胞因子,是造血因子家族的新成员，具有调节B淋巴细胞及单核细胞、抑制HIV复制、促进原始造血前体细胞的增殖及分化等功能。本论文用超声波核化学渗透两种细胞粉碎方法对IL-13基因工程菌进行了细胞破碎实验，并系统地考察了pH、温度、时间、化学试剂等因素对细胞破碎效果的影响，得岀了最佳的细胞破碎核包涵体融解工艺条件。将破碎后的菌悬液用双水相萃取的方法进行了口标产物的初步分离纯化，并对双水相体系的齐影响因素进行了深入细致的研究。这将为我们进一步地研究以包涵
2、体形式存在于基因工程菌内地H标产物分离纯化新方法打下良好的基础。关键词：IL-13,包涵体，细胞破碎，双水相，分离AbstractInterleukin(IL-13)isarecentlydescriedproteinandamemberofthefamilyofhematopoietics.ItisaproteininvitromodulatorofBlymphocyteandmonocytefunctions.Recently,itwasreportedthatitalsocouldinhibittheHIVreplica
3、tioninmonocyteandregulateproliferationanddifferentiationofprimitivehematopoieticsprogenitorcells.Inthisstudy,wetrydisruptingJM109cellsbymeansofultrasonicandchemicalosmosis,primarilytestingthefunctionsofpH,temperature,time,chemicalreagentandsoon,andachievinganoptimal
4、processofcelldisruptionandinclusionsolution.Inaddition,wecarryonthepartitionofGST-IL-13byaqueoustwo-phasesystemandcarefullychecktheeffectsofthemainprocessingparameters.Keywords：IL-13,inclusion,celldisruption,aqueoustwo-phase,Partition目录第一章前言11」发展生化“下游”技术的意义11.2基因工程蛋
5、白质分离纯化的原则11.3现有白细胞介素一13的分离纯化方法71.4蛋白质分离纯化的方法91.5木论文的立项背景及研究内容12第二章实验材料与方法132.1概述132.2实验材料与方法15第三章实验结果与讨论173.1GST-IL-13的诱导培养173.2GST-IL-13总含量的测定203.3化学破碎223.4GS双水相萃取的研究23第四章结论与展望244.1结论244.2对进一步研究的展望26参考文献27致谢28附录29第一章前言1.1发展生化“下游”技术的意义现代生物技术的迅猛发展使当今世界发生了日新月异的变化。迄今为止
6、，人们已经能够设计、制造、生产多种具有重要价值的蛋白质，如胰岛素(insulin)、白细胞介素(interleukin)、干扰素(interferon)、促红细胞生长素(EPO)和肿瘤坏死因子(TNF)等。……1.2基因工程蛋白质分离纯化的原则生物产品有许多使生物高分子，必须考虑到产品的变性和活性恢复等问题。如果选取的条件合适，也可以通过耦合不同技术来改进分离工艺。一般认为，要实现基因工程蛋白质分离纯化的高效率、高纯度和低成本必须做到以下几点：①使用温和、高效的方法；②尽可能地减少操作步骤；③减少化学和生化试剂地使用。Prok
7、opakis等提出了优化分离纯化步骤的基本规则，用以指导分离纯化操作的改进。具体规则如下：①选择分离操作必须基于产品的物理化学性质和生化性质；②高产量的朵蛋白必须要除去；③最高效率地利用ri标产物与杂质间地理化性质差异；④尽可能地将高效的步骤放在前而；⑤把操作最困难的步骤放在最后山2】。1.3现有白细胞介素一13的分离纯化方法1993年，Mckcnzic首次提出白细胞介素一13(IL-13)的名字，此后，人们逐渐发现了IL-13的许多生物学活性：刺激前髓样细胞(TF—1)的增殖，直接诱导原始造血前体细胞(Lin~Sca-l+)
8、的增殖及分化；诱导B细胞表达MHC-II类抗原和CD23,并存进其增殖及分泌Ig;抑制HIV单核细胞小的复制，并具有抗炎、抗肿瘤等多种作用。第二章实验材料与方法2.1概述本论文主要从IL-13地分离纯化入手，将传统的细胞破碎和双水相萃取（选择PEG盐系统）用于IL-13的提纯
