资源描述：
《白血病的生物治疗方法探讨》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、白血病的生物治疗方法探讨來源：中国肿瘤生物杂志作者•：张阳，张连生，曾鹏云，吴重阳，易良才，口俊［摘要］目的：研究树突状细胞(dendriticcell,DC)联合同源细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedkiller,CIK)对急性■髓细胞白血病细胞株KG-la'I1白血病T细胞(leukemicstemcell,LSC)的体外杀伤和诱导凋亡作用。方法：分离健康人外周血单个核细胞，贴壁细胞用GM-CSF和IL-4诱导培养DC,悬浮细胞用IL2IL-1.IFN-y和CD3mAb诱导培养CIK。将KG-1a细胞冻融物作为抗原负XDC
2、(即Ag-DC)，与CIK共培养作为实验组(Ag-DC-CIK)，无抗原负X的DC与CIK共培养作为对照组(DC-CIK)，单独CIK作为空白对照组，与KG-1a共育后流式细胞术检测各组细胞中CD34+CD38-CD123+白血病干细胞的比例。DC-CIK与KG-1a细胞共培养，流式细胞术检测各组细胞中KG-1a细胞与CD34+CD38-CD123+细胞的凋亡率。结果：外周血单个核细胞成功诱导DC.CIK组、DC-CIK组及Ag-DC-CIK纽中CD3+CD56+细胞比例为(17.36±4.44)%、(28.22±3.66)%和(36.16±5.8
3、8)%，依次升高(P<0.05)。与对照组相比,Ag-DC-CIK组与DC-CIK组细胞中CD34+CD38-CD123+细胞比例显著降低［(8.78±0.62)%vs(3.95±0.57)%、(3.03±0.62)%,Pv0.01］。DC-CIK可诱导KG-1a细胞凋亡，凋亡率由(2.34±0.74)%上升至(12.27±1.01)%,但对其中CD34+CD38-CD123+细胞无明显的诱导凋亡作用。结论：DC联合CIK能杀伤急性髓细胞口血病干细胞，但无明显的诱导凋亡作川。近年随着新药的出现和治疗方法的改进，白血病的完全缓解率和长期无病生存率已有
4、了明显提高，但较高的复发率和多药耐药仍是目前治愈白血病的主要障碍。随着对白血病研究的深入及白血病干细胞(leukemicstemcells,LSCs)概念的提出,LSCs被认为是白血病复发的主要根源,清除LSCs才有可能根治白血病［1-2］e细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-inducedcells,CIK)是-•种新型的免疫活性细胞，CD3+CD56+T细胞圧其主耍效应细胞，具有强大的抗瘤活性和非MHC限制性杀瘤的优点［3］。DC与CIK细胞共培养能捉高CIK细胞增殖及杀伤活性［4］。课题组询期研究［5-6］发现，DC与CIK细胞共培养对
5、多种肿瘤细胞包括白血病细胞均冇明显的杀伤作用，但DC联合CIK(DC-CIK)对LSCs的杀伤作用少有报道。本研究以CD34+急性髓细胞白血病细胞株KG-1a为模型，观察DC-CIK对LSCs的体外杀伤作用，为LSCs靶向治疗及临床应用DC-CIK清除残存口血病细胞提供实验皋础。1材料与方法1.1实验材料rhTNF-a购自美国Peprotech公司，rhlL-4及rh-GM-CSF山厦门特宝生物工程公司惠y,CD3抗体、rhIL-RrhlL-2及IFN-丫均购自武汉博士德生物匚程有限公司，CD80、CD83、CD14、HLA-DR,CD3、CD8、
6、CD56、CD34、CD38抗体均为美国eBioscience公司产品，CD86、CD1a.CD123抗体购自美国BD公司，RPMI1640干粉购自美国Gibco公司，胎牛血淸购自杭州四季青生物制品公司。AnnexinV-FITC试剂盒购自南京凯基生物发展冇限公司。1.2KG-1a细胞冻融抗原的制备急性髄细胞口血病细胞株KG-1a购自上海拜力生物科技有限公司。收集对数生长期KG-1a细胞，生理盐水洗涤3次后，调整细胞密度为1x107/ml,置液氮中10min,取出迅速放入37°C水浴锅中，重复3次，离心后取KG-1a细胞冻融上淸，经0.22pm微孔
7、滤膜过滤，4°C保存备川。1.3DC的体外诱导和培养采集健廉志愿者外周血12ml,常规分离外周血单个核细胞，用RPMI1640完全培养棊调整细胞密度至2x106/ml,置丁-5%CO2、37°C培养箱中培养3h,收集贴壁细胞（同时收集悬浮细胞川丁培养CIK）。加入适量RPMI1640完全培养基、100ng/mlrhGM-CSF及100ng/mlrhlL-4,隔日半量换液，每日倒置显微镜观察细胞形态变化及生长情况。培养第5天时将DC分为2组:一组加入KG-1a冻融抗原50川（即Ag-DC）,另—纽加入RPMI1640完全培养基50$,第7天两组各加入
8、rhTNF-a50ng/mL1.4CIK的体外诱导、培养取1.3中收集的悬浮细胞，调整细胞密度为1J06个/ml,加入IF
