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时间:2019-10-24
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1、蛋白N端测序订单生工承诺:高质.高效.中立、守秘姓名:实验室负责人:邮寄地址:单位:发票抬头:电话:手机电邮@H期:生工编号样品编号PVDF膜考马斯亮蓝染色/丽春红染佰是否已脱色目的蛋白量MlOOpmol洛液Buffer成份(不含蛋白酶)浓度(M10um/L)体积(M20u1)纯度($95%)冻干粉冻干前缓冲液「1的蛋白量MlOOpmol纯度(395%)种属来源衣观分子量(KDa)欲测定氨基酸数H理论氨基酸序列(E-ma.i1传送)备注说明:mrA®半~r生工生物工程(上海)股份有限公司I▲I▲SangonBiotech(Shan
2、ghai)Co.rLtd.1、请务必使用PVDF膜。不能用NC膜(硝酸纤维素膜)替代。2、请使用厚胶转膜,以保证转膜后条带淸晰。如果转膜后目的条带不清晰,请累积三条以上目的条带。4、3、电转移缓冲液建议使用CAPS缓冲液,不要使用Tris—廿氨酸缓冲液。公司严格按照客八要求所测氨展酸数ri检测,客户要求所测氨基酸数目大于实际样品氨基酸数目,以客八指定待测的氨基酸数目收费a端封闭除外)。5、请用E-Ma订传送,勿用传真。蛋白质N末端测序样品要求说明:一、通则1、样品N端未被封闭。2、样品如被修饰,请详细告知修饰方式。3、样品如有特殊
3、理化性质(如膜蛋口、PVDF转膜不易结合,特殊酶活性,特殊结构等),请详细说明。4、若为已知序列样品,请告知预期序列信息。5、请务必告知样品表观分子量范围。6、建议客户提供溶液样品或含样品的PVDF膜,微量样品请不要以冻干粉形式捉供。特殊情况请致电生工生物工程(上海)股份有限公司咨询。二、溶液1、样品纯度应达到95%以上(HPLC),标明准确纯度。纯度越高,实验结果越理想。2、样品浓度不低T10umol/L,体积不少T20ul,并标明准确浓度。3、请务必标明样品缓冲液的成份,并保证样品缓冲液中不含蛋白猶。4、请门留备份,以便交流实
4、验情况。5、若运送路程较长,请将样品置入冰盒内保存,以防止蛋白质降解。PVDF1、请务必使用PVDF膜,不能用NC膜(硝酸纤维素膜)替代。2、为防止部分蛋白质可能发生的在电泳过程屮被胶内杂质封闭N末端。请自行考虑做预电泳。R卩用低电流跑空胶2〜2.5小时后再上样进行电泳分离。3、电泳过程中,应尽量避免条带拖尾现象。用于测序的PVDF膜上条带应狭窄清晰。4、尽可能使用厚胶转膜,这样能够保证转膜后单位面积上样品量相对多些。如若转膜后目的条带不够清晰,请累积三条以上的H的条带用于测序。5、样品转膜后,请使用CoomassieR-250染
5、色1分钟,避免使用CoomassicG-250。脱色液屮的乙醇可增加到40—60%,脱色过程小注意观察。背景颜色很快脱掉后,纯净水里漂洗一下,在滤纸上晾干。6、含样品的PVDF膜请夹在滤纸间保存在密闭塑料袋中,冰箱内可以放置3〜6个月。7、电转移缓冲液建议使用CAPS缓冲液,而不要使用Tris—甘氨酸缓冲液。
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