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1、Ill［液中微粒的流式检测及临床意义來源：中华检验医学杂志关键词：泄微粒W流式检测临床意义各种血液细胞及血管内皮细胞受到刺激而活化或发生凋亡示，细胞膜磷脂酰丝氨酸由胞膜内层进入外层，以出芽方式形成小泡状结构而脱落，形成所谓的“微粒(microparticle,MP)”。正常人体血液中即存在少虽:MP,而在许多疾病'I1MP水平明显升高。MP具有促进血液凝固反应发生与血栓形成等多种重要生物学活性。越來越多的研究提示，检测血液MP水平与性质有助于监测病情、指导治疗与疗效判断。一、血液中微粒的检测方法1、流式细胞术(flowcytometry,F
2、CM)MP膜上表达M其来源细胞和同的表面标志分子，选取针对特界性标记分子的单抗，它nJ确定其细胞來源；MP体积远小于其來源细胞，流式细胞术检测中的前向散射光强度可反映颗粒大小；MP外踢的磷脂酰丝氨酸可应用荧光标记AnnexinV显示，这些都为应川FCM检测MP提供了基础。对细胞表面标志分了的确认与单克隆抗体制备技术的发展及完善，使FCM成为当今定量与定性检测MP最为广泛的方法。检测不同细胞来源的MP所使用的单抗如下：血小板微粒(plateletmicorparticles,PMP)使用抗糖蛋白抗体，比如抗CD41、抗CD6I与抗ClM2a等
3、抗体；检测内皮细胞微粒(endothelialmicroparticles,EMP)使用的抗体包括抗CD31、抗CD51与抗CD144等抗体；检测单核细胞微粒(monocyte.dcrivedmicroparticles,MDMP)使用的抗体包括抗CD14抗体;检测淋巴细胞微粒使用的抗体包括抗CD3、抗CD4与抗CD19等抗体。可见检测某种细胞来源的MPnJ*有多种抗体供选择，而应用不同抗体检测结果不尽和同，比如应用抗CD41a抗体检测岀的PMP水平高于抗CD61和抗CD42a抗体检测出的水平”；应用抗CD31抗体检测冠心病患者EMP水平较
4、正常对照升高10倍，而抗黏附分子抗体检测EMP仅增高1.5—2.()倍，这可能是由于不同抗体检测灵敏度不同所致。除表达来源细胞表而标志分子外，MP可表达某些來源细胞原來并不表达的蛋口分子，使MP获得新的生物学活性，比如PMP表达组织因子(tissuefactor,TF),而在巨核细胞并未检测到此分了，TF使得PMP获得促凝活性，在许多疾病中发挥致病作用。由于多步骤操作易导致细胞体外激活，尤具是血小板，从而影响检测准确性，因此，检测者除了要注意选择抗体之外，对FCM的具体操作也应作进一步改善，以提高准确性与灵敏度。比如在样木收集方面，冇研究建
5、议使用柠檬酸.茶碱.腺昔酸•双啼达莫抗凝管，与枸椽酸钠抗凝相比，能更有效抑制血小板体外激活，保证了结果的可靠性••：由于MP很小，有可能不能通过前向散射光强度來反映(能检测最小颗粒直径不小于0.1p.m),此外MP表面积小导致标记的荧光强度小，使得荧光检测灵敏度与准确性降低，改良方法屮使川己知直径的微球来校正流式细胞仪，从而提高准确性；应用3.()m与().8m乳胶微粒作为内参照检测PMP,0・伽乳胶微粒用于设门，3.0m乳胶微粒用于定量，此方法冇效排除血小板的干扰,也有效地提高了准确性。2、酶联免疫吸附试验(ELISA)ELISA方法也可
6、用于检测MP,但远不及FCM广泛。Osumi等选用多种抗血小板抗体以期建立检测PMP更优良的ELISA方法。结果发现以抗CD42a抗体作为捕获PMP的一抗，抗CD42b抗体作为二抗，可获得阳性率与特异性最高的检测结果，该方法与FCM检测结果具有一致性，提示应用ELISA检测MP的可行性。也有人先利用AnnexinV捕获血液中的MP,之后应用特界性抗体以确定MP的细胞來源，同样获得了有意义的研究结果。二、血液中微粒检测的临床意义1、冠心病血小板活化聚集、血栓形成以及血管内皮损伤参与冠心病(coronaryarterydisease,CAD)的
7、发牛.，这些病理变化均导致MP的生成；而随后发牛的缺血缺氧与炎症刺激，进一步促进MP的产生。研究发现血液中EMP水平与CAD各临床亚型，包括心肌梗死(myocardialinfarction,MI)>不稳定性心绞痛(unstableangina,UA)与稳定性心绞痛(stableangina,SA),存在如下的相关性：FCM检测结果显示，EMP在各亚型都显著升高；3种亚型'I'CD31(+)EMP水平高低顺序为：MI>UA>SA,而CD51(+)EMP无此规律;MI首发患者CD31(+)EMP显著高于MI复发者。由此可见，EMP水平，尤其是
8、CD31(+)EMP水平，可提示冠脉缺血缺氧与炎症反应的严重程度，是反映CAD屮内皮损伤的有川指标。冠心病术示治疗也导致血液中MP水平和性质的变化。经皮冠状动脉支架植入术后易发生
