猪圆环病毒抗原PCVAg酶联免疫分析ELISA

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1、猪圆环病毒抗原（PCVAg）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。使用目的：本试剂盒用于测定猪血清、血浆及相关液体样本中圆环病毒抗原（PCVAg）的含量。实验原理本试剂盒应用间接法测定标本中猪圆环病毒抗原（PCVAg）水平。用纯化的抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入已知浓度的圆环病毒抗原（PCVAg）标准品和未知浓度的圆环病毒抗原（PCVAg）待检样品，温育后，加入生物素标记的抗IgG抗体，再与链霉亲和素-HRP结合，形成免疫复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HR

2、P酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的圆环病毒抗原（PCVAg）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（0D值），通过标准曲线计算样品中猪圆环病毒抗原（PCVAg）浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlx1瓶标准品(36Ong/L)0.5mlx1B2链霉亲和素・HRPbmlx1瓶标准晶S2T48Ong/L)0.5mlx1瓶3酶标句被板127Ly8#8标准品S3(90ng/l)05mlv14生物素标记的抗抗体Amlv1瓶标准品G4(45nq/l)0Smlv1瓶5显色剂A液6ml

3、*1瓶标准品^5X22,5nq/D-0-5xnlx16品色剂R滿6mly1/Wg7终止液6mlx1瓶10封板膜2张标本要求「不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20°C保存，但应避免反复冻融操作步骤1.2.3.4.5.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品，

4、其余各步操作相同）品孔。然后在标准品孔中加入标准品501在样本反应孔中加入板膜，轻轻振荡混匀，37°C温育45分钟。配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸憾水30倍稀释后备用洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置重复4次，拍干。加生物素标记的抗-IgG抗体：每孔加入生物素标记的抗-IgG抗体钟、标准品孔、待测样50微升样本，盖上封30秒后弃去，如此50"。37°C温育30分6.洗涤：操作同4。7.加链霉亲和素-HRP：每孔加入50/J的链酶亲和素-HRP,轻轻振荡混匀，37°C温育30分钟。6.洗涤：操作同4。7.

5、显色：每孔先加入显色剂A50",再加入显色剂B50",轻轻震荡混匀，37°C避光显色15分钟.8.终止：每孔加终止液50〃，终止反应（此时蓝色立转黄色）。门•测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值待入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1

6、.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4.如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先将样本稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数（x5xn）。5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.本试剂不同批号组分不得

7、混用。显色剂B请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。线性范围：10ng/L-360ng/L规格：96猪份/盒保存条件及有效期1.试剂盒保存：；2-8°Co1.有效期：6个月