微生物操作培训课件大纲

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1、微生物检验技术培训大纲一.玻璃器皿准备（1）玻璃器皿的清洗新购进玻璃器皿处理新构进的玻璃器皿，均含有游离碱，故应先浸于洗液或20ml/L盐酸内数小时，再用自來水冲洗干净。待干燥后，灭菌备用。日常清洗注意事项a.一切使用过得玻璃器皿，用完后先用清水冲洗干净，然后用热的肥皂水洗刷清洁，再用清水冲数次，蒸憾水冲洗两次，自然风干，备用。如果肥皂水洗刷仍未清洁，可用洗液浸泡，洗出后用清水冲洗5次以上，再用蒸憾水冲洗两次。b.吸管用完后应立即用清水和蒸憾水冲洗干净即可，如附有污物可用洗液浸泡。c・附有油污的器皿，若用热的肥皂水不能洗净时

2、，切不可用洗液浸泡，而应先用热的酒精、汽油或丙醇洗涤;或用氢氧化钠热溶液2（%）浸泡10-15分钟，然后再用稀盐酸洗一次，用水冲洗数次。油污如仍未岀去，再重复以上手续一次。洗液的配制和使用：a.在35ml重辂酸钾饱和液（重辂酸钾180g溶于100ml水中，或63g重銘酸钾溶于35g水中），慢慢加入粗制浓硫酸1000ml玻璃器皿一般在这种洗液中浸泡2h以上即可除污。如将其加热至80-100°C（但不可加热至发烟或煮沸，此时温度达240-250°C），浸泡10-15分钟，效力更大。b・溶解80g重铅酸钾于1000ml温水中，待凉

3、后，徐徐加入粗制浓硫酸100ml于水中即成含硫酸10%的清洗液，使用时，将玻璃器皿先浸于这种洗液中24h,然后清水和蒸憾水冲洗。c.溶60官重銘酸钾于300ml热水中，慢慢加入粗制浓硫酸460ml,边加边用玻璃棒搅拌，因为此液产牛大量热，在配制时应用耐热容器，并放在水槽中以便冷却。一般玻璃器皿在此溶液中浸泡6h以上即可。如何判定清洗干净既不聚成水滴，也不成股流下。（2）微生物检测常用玻璃器皿及规格所用玻璃仪器及规格：吸管：lml和10ml,标有0.1ml刻度平皿：皿底直径为9cm试管：15X150mm、18X180mm.20

4、X200mm、酒精灯三角瓶:250ml、300ml广口瓶：用于采样大肠菌群：双料:、单料、复发酵单料乳糖胆盐发酵管：20g蛋白腺、10g乳糖、5g胆盐、1.6%漠甲酚紫乙醇溶液0.6ml（0.04%漠甲酚紫水溶液25ml）、蒸馅水100制法：将各成分溶于1000ml水中，溶解后将PH值调至7.4分装于18X180mm试管中，115C高压灭菌15分钟。双料乳糖胆盐发酵管：单料除水外其他各成分加倍，分装于18X180mm试管中.乳糖发酵管：20g蛋白腺10g乳糖1.6%澳甲酚紫乙醇溶液0.6ml（0.04%澳甲酚紫水溶液25ml

5、）蒸憾水1000mlPH值调至7.4取3ml分装于12X120mm试管中，115°C高压灭菌15分钟。（3）玻璃器皿的准备、包扎、高压灭菌条件棉塞制备：用普通棉花纱布做成所需大小的棉塞，高压灭菌I古I定。吸管：在吸管的上端塞上一小段棉花，防止吸管中的菌液、酸液、碱液等吸入口中。塞入的棉花应与吸管口保持5mni左右的距离棉花全长不短于10mm,赛好棉花后用截成条的I口报纸包装，先把吸管的尖端放在纸条的一端，45度角折叠纸条，包住尖端。以螺旋式包扎剩余的纸条折叠打结，也可把塞好棉花的吸管放入铁皮筒屮，加盖密封121°C高压灭菌1

6、5分钟。平皿：用过的培养皿中有废弃的培养基，为了防止杂菌传播污染环境，也应先经高压灭菌或沸水煮沸半小时后，倒掉污物洗涤。新的培养皿可直接洗刷，洗净后用蒸憎水冲洗三次，培养皿全部向下，一个接一个压着皿边，然后扣在桌子上空净水。用报纸包好或装在铁皮筒中，121°C15分钟。三角瓶：洗刷干净的三角瓶塞上塞子用截成方块的旧报纸包好，用绳子捆住。一.培养基选用.配制、成分作用、高压灭菌条件（表格）检验项目培养基配制成分作用高压灭菌条件菌落总数营养琼脂按说明分装于300ml三角瓶屮琼脂：凝固剂121°C15分大肠菌群乳糖胆盐发酵管蛋口腺

7、：氮源乳糖：碳源胆盐：抑菌剂115°C15分伊红美兰琼脂按说明分装于300ml三角瓶中伊红美兰：鉴别性培养基121°C15分乳糖发酵管115°C15分霉菌、酵母菌孟加拉红琼脂按说明分装氯霉素：抑制杂菌生长菌121°C15分嗜冷菌（常规）营养琼脂按说明分装于300ml三角瓶中121°C15分嗜冷菌（快速）酵母提取物2.5g胰蛋白腺5.0g脱脂奶粉l.Og葡萄糖l.Og琼脂10-15g蒸憾水lOOOmlPIl值6.9121°C15分芽抱及耐营养琼脂同上121°C15分热芽抱一.高压锅正确使用方法及注意事项使用规则1)松开紧固螺杆

8、，将器盖翻开，放入消毒物后，为胆•内注水，并观测水位至最高水位线即可，在顺时针方向拧紧螺杆后，消毒器就可以接通电源。2)加热时，应把放气阀推向垂直放气的位置，使冷空气加热由筒内逸出。3)等较急的蒸汽冒出时，关闭蒸汽阀直至压力表指针上升至消毒物所需压力后开始记消毒灭菌时间。4)消毒完毕，切断