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时间:2019-10-22
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1、实验四人类核型分析一.实验目的了解人类染色体的形态特征,掌握其核型分析的基本方法。二.材料人正常和异常的染色体标本,人显带染色体标本三.试验内容与方法:核型:指某种生物个体或某一分类群(种、亚种或变种、居群)的一个体细胞全部中期染色体的数目、大小和形态等特征的总和。用来表述物种的特点和亲缘种属之间的关系。核型分析:将待测细胞的染色体按照该牛•物固有的染色体形态特征和规定,进行配对、编号和分组,并进行形态分析的过程过程。Denver体制:按照Denver会议(I960年)提出的染色体命名和分类标准,将人类体细胞的46条染色体按大小(根据长度递
2、减顺序)、着丝粒的位置分成七组(A、B、C、D、E、F、G、)23对的排列,并将副缢痕和随体作为识别染色体的辅助指标。人类染色体核型分析标准是丹佛(Denver)体制(人类有丝分裂染色体的标准命名体制)。该体制规定:每一条染色体可通过相对长度、臂率和着丝粒指数等三个参数予以识别;每条染色体长度HM长度=xioo%22条常染色体+X的总长度短臂长度右丝粒指数=X100%该条染色体长度长臂长度曹率=——短臂长度—次—长R(q)—A1染色体按右丝粒住染色体长轴的位起•分成:中央着丝将让色体:1/2〜5/8亚小着丝粒染色体:5/8〜7/8近端看丝粒
3、染色体:7/8至末瑞-ptoW■qKR人的.1♦夷住非显带染色体:染色体标木制作好后,不经处理肓接染色,整条染色体均匀着色(相对于后面的显带染色休而言)。人中期细胞染色体(数目2N=46)结构特点G显带染色体:G带技术是其屮最常川的技术,rflPardue和Gall(1970)建立。屮期染色休经胰酶处理及Giemsa染色后,能在其长轴上显示出明暗交替的横纹,每个染色体都有特定的带纹,可应用染色体分带技术,来准确地辨别每个染色体。一个细胞中期分裂相的G显带技术,每个染色体被染成深浅相间的带纹,浅的部分称为明带或浅带,深的部分称为暗带或深带。G
4、带反映了染色体DNA上A・T的丰富区,在人类中约有2000条G带可被鉴别,在间期核呈固缩状态,而且是DNA晚复制区之一。有相当一部分中度重复序列DNA可能在G带区,Giemsa染料在G带区是与DNA结合,而且与结合DNA的染色质非纟H.蛋白有关。G带区位于染色体的两臂上,和Q带区相对应,而与R带区相反。人类细胞染色体共分24种不同的带纹(22对常染色体和X、Y染色体)(一)人类正常'染色体及其带型的识别1.非显带染色体的识别:根据染色体按大小(根据长度递减顺序)、着丝粒的位置分①A群:包括第1、2、3对染色体,体积人,彼此易于区别,有屮央着
5、丝粒,第二对染色体的着丝粒略偏离中央。②B群:包括笫4、5对染色体,较大,均为亚中部着丝粒,彼此不易区分。③C群:包括6-12对常染色体和X性染色体,中等大小,为亚中部着丝粒染色体,彼此间难以区分,第6对的着丝粒染色休靠近屮央,X染色体人小介于第6对与第7对之间,第9对染色体长臂上有一次缢痕,第11对染色体上的短臂较长,第12对染色体的短臂较短,这些特点冇助于染色体的鉴别。⑤D群:包括第13、14、15三对染色体,中等大小,均为近端着丝粒,有随体,彼此间不易区分。⑥E群:包括第16、17、18三对染色体,中等大小,第16对有中央着丝粒,长臂
6、上有次缢痕,易于区别,第17、18对上有亚中部着丝粒,难以区分,后者的短臂较短。⑦尸群:包括第19、20两对染色体,体积小,染色体比G组稍大、均为中央着丝粒性,呈“梅花状“,彼此难以区分。⑧G群:包括笫21、22两对常染色体和Y染色体,是最小的一组,均为近端著丝点,短愕末端有随体,长臂常呈分叉状,21号稍小于22号。Y染色体被隶属于该组,短臂无随体,一般较21、22号大点。上述人的常规核型中,1〜22号为常染色体,男女共有,另一对为性染色体,决定性别,男性为XY,女性为XX,人的正常核型写法:男46,XY:女46,XX0A一秃二蛇腰三蝶飘B
7、四像鞭炮五黑腰C六是小白脸七上(着丝粒上部深染)八下(着丝粒下部深染)九苗条十号长臂近带好十一低(脚深染)来十二高(头深染)D十三下(下部深染)十四屮(屮部深染)十五上(上部深染)E十六长臂缢痕大十七长臂带脚镣十八人小肚皮大FI九中间一点黑二十头重脚轻G二十一像葫芦瓢二十二头上一点黑X—肩挑Y黑脚丫2、G显带染色体的识别短愕(p),长愕(q),区,带人类I号染色体带的识别图解(二)正常人体细胞核型的分析1、染色体制片一显微照相一放人2、测量:染色体长度3、计算:臂比、着丝粒指数、相对长度;4、配对:根据形态特征5、排列:a)长度从大到小;b
8、)臂比从大到小;c)特殊的染色体最后;6、剪贴:细剪,按顺序从大到小,短臂在上,着丝粒于一直线,贴图7、分析结果:如为男性核型应为46,XY;女性为46,XXo四、复习思考题:1
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