小鼠肺炎病毒抗体（PVM）酶联免疫分析

《小鼠肺炎病毒抗体（PVM）酶联免疫分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、小鼠肺炎病毒抗体（PVM）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研允使用。96T使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中肺炎病毒抗体（PVM・Ab）表达。实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中小鼠肺炎病毒抗体（PVM・Ab）表达。用纯化的小鼠肺炎病毒抗原包被微孔板，制成固相抗原，可与样品屮肺炎病毒抗体（PVM・Ab）相结合，经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后再与HRP标记的肺炎病毒抗原结合，形成抗原•抗体•酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色oTMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶

2、标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中小鼠肺炎病毒抗体（PVM・Ab）的存在与否。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlXl瓶2酶标试剂6mlX1瓶8阳性对照0.5mlXI瓶3酶标包被板12孔X8条9阴性对照0.5mlXI瓶4样品稀释液6mlXl瓶10说明书1份5显色剂A液6mlXl瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlXl/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于・20°C保存，但应避免反复冻融2.不能

3、检测含WN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤1.编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孑L（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）2.加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照50川。然后在待测样品孔先加样品稀释液40卩1,然后再加待测样品10Plo加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，3.温育:用封板膜封板后置37°C温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馆水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，

4、静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶标试剂50）11,空白孔除外。7.温育：操作同3。&洗涤：操作同5。9.显色：每孔先加入显色剂A50gl,再加入显色剂B50

5、il,轻轻震荡混匀，37°C避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50卩1,终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结:准备试剂，样品和标准品计算和结果判定：试验有效性：阳性对照孔平均值＞1.00;阴性对照平均值W0.10临界值（CUTOFF）计算：临界值

6、二阴性对照孔平均值+0.15阴性判定：样品OD值＜临界值（CUTOFF）者为肺炎病毒抗体（PVM・Ab）阴性阳性判定：样品OD值2临界值（CUTOFF）者为肺炎病毒抗体（PVM・Ab）阳性C注意事项1.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。2•试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15・30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。1.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴屮加温助溶，洗涤时不影响结果。2.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。3.底物请避光保存。6•试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长

7、检测时，参考波长为630nm7.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为2M的硫酸，使用吋必须注意安全。保存条件及有效期1.试剂盒保存：；2-8°Co2.有效期：6个月