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《100株临床分离致病酵母体外药敏试验分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、100株临床分离致病酵母体外药敏试验分析屮华皮肤科杂志2000年第33卷第5期章强强苏逸丹李莉王家俊摘要目的评价临床致病性酵母对抗真菌药•物敏感性及耐药性。方法根据美国国家临床实验室标准化委员会M27-A微量稀释法对临床致病性酵母作了氟康哇、二性霉素B、5—氟胞咳喘、伊曲康呻及酮康畔5种抗真菌药物敬感性测定。结杲65株念珠菌属的MIC范围为：氟康畔0.125〜64ug/mL,95.38%(62/65)嫩感,2株耐药，占3.08%；伊曲康哇0.03-2ug/mL,63.08%(41/65)感,3株耐药,占4.62%；5—氟胞＜1®0.125〜32Pg/mL,93.8
2、4%(61/65)敏感,2株耐药,占3.08%;二性霉素B0.06〜2ug/mL,96.92%(63/65)敏感，2株耐药,占3.08%;酮0.03-0.5Ug/mL,全部敏感(65/65)。35株新生隐球菌临床分离株对5种抗真菌药物的MIC范围分别为：氟康畔2〜64ug/mL,伊曲康哇0.25〜lPg/mL,5—氟胞＜1®0.25〜64ng/mL,二性霉素B0.03〜lug/mL,酮康U坐0.125-1Pg/mLo结论美国国家临床实验室标准化委员会M27-A微量稀释法具有操作简便，实川性强，结果稳定，重复性好的优点。临床致病性酵母及其不同的菌株对5种常川抗真菌药
3、物的敏感性存在差异。关键词：念珠菌属；新型隐球菌；微生物敏感性试验近年來山于深部真菌感染的逐渐增多，耐药菌株的出现及各种抗真菌药物的相继问1比,正确合理地选择抗真菌药物及对抗真菌药物敏感性的评价己成为一个突出而且亟待解决的问题［1］。我们根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定的《酵母菌液基稀释法抗真菌药物敏感性试验参考方案》(NCCLSM27-A)⑵，采川微量稀释法技术对临床分离的65株念珠菌属和35株新型隐球菌作了氟康哩、两性霉素B、5—氟胞喘喘、伊曲康醴及酮康哇5种抗真菌药物的墩感性测定，为建立统一的标准化抗真菌药物嫩感试验方法、耐药性标准的确立
4、提供参考依据。材料与方法一、材料1.抗真菌一药：氟康醴由上海三维制约有限公司提供,批号：971208,含量99.7%；两性雷素B山上海先锋药业公司提供，批号：971021,含量99.8%；5—氟胞喘噪山中国药科大学制药股份有限公司提供，含量99.8%；伊曲康卩坐和酮康呻参考标准品(纯粉)均由墨尔木阿尔列来徳(Alfred)医院真菌室提供。2.试验菌株：65株念珠菌属分别來自临床送检的痰、尿、粪等标本，选取直接镜检和培养均阳性的菌株，按常规方法、芽管试验和API20CAUX鉴定，其中包括白念珠菌47株,非门念珠菌(热带念珠菌、近平消念珠菌、平滑念珠菌、季也蒙念珠菌)
5、18株。35株新生隐球菌均來自临床送检的脑脊液标本，经墨汁涂片立接镜检、咖啡酸试验、尿素酶试验及37°C生长鉴定证实。3.参考菌株：3株白念珠菌参考菌株ATCC76615:09、ATCC76615:108、ATCC76615:19和4株新生隐球菌标准菌株:ATCC32609、BLS109、CBC690KCDC3502市笫二军医大学长征保院皮肤科惠赠，其中□.知ATCC76615：09对氟康哇娥感，ATCC76615：108Xj氟康哇中度敏感，ATCC76615:19对氟康啤耐药。4.培养基：①RPMI1640液体培养基：RPMI1640粉(含谷氨酰胺，不含碳酸氢钠
6、，美国Lifetechnologieslnc)10.4g,三氮吗啡琳丙磺酸(MOPS,Fluka进口分装)34.53g,蒸馅水900mL,NaOH调节pH至7.0,定容至lOOOrnL,用直径0.2um的无菌针头滤器(GelmanScience)滤过除菌，置4°C冰箱备用。②改良沙堡琼脂：葡萄糖40.0g,蛋M东10.0g,琼脂20.0g,蒸馆水lOOOmL,氯霉素0.05mg/mL,高压灭菌。二、方法参照NCCLSM27—A推荐的酵母菌微量稀释法药敏试验进行。1.微量药敏板制备：将配制好的抗真菌药物贮存液川RPMI1640液体培养皋做稀释液进行10级倍比稀释，使
7、氟康“坐和5—氟胞卩密睫的起始质量浓度为!28ug/mL,终末质量浓度为0.25Pg/mL,两性霉素B、伊曲康卩坐和酮康I坐的起始质量浓度为32ug/mL,终未质量浓度为0.06ug/mL,以上各药质量浓度均为2倍应测试药物质量浓度。用二甲基亚fiRl（DMSO）制备的抗真菌药储存液经RPMI1640稀释后DMSO终体积分数不超过1%,经对照试验此体积分数不抑制酵母菌的生长。将稀释好的药液对应加在无菌96孔U形底微量培养板的孔洞中，从第1孔至第10孔洞浓度由高到低，每孔lOOuLo第11、12孔加不含药液的RPMil640液体培养基，其中第11孔为主长对照，第12
8、孔为空白对
