天津七里海野生苇蘑科属探究

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1、天津七里海野生苇蘑科属探究摘要：对采集于天津市宁河县七里海地区芦苇地的野生蘑菇苇蘑进行了形态学和rDNAITS区段克隆测序及序列特征比较分析鉴定。结果表明，采集的这种野生蘑菇为蜡伞科(Hygrophoropsidaceae)>拟蜡伞属(Hygrophoropsis)蘑菇。关键词：苇蘑；蜡伞科；拟蜡伞属中图分类号：S646.9文献标识码：ADOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.05.014天津市宁河县七里海地区芦苇地产苇蘑。每当盛夏潺暑绵雨过后，芦林苇海中多年败叶腐草厚积，形成难得的底质、湿度

2、、温度和光照，苇蘑便蒸郁而生。人们采集后，或鲜食,或晒干食用，味道极其鲜美，远胜于其他蘑菇。在文献调研中，笔者发现国内外关于苇蘑的报道廖廖无几，而且天津七里海苇蘑与一些报道注明的种属形态不是很一致[1-2]o鉴于此，从其形态特征和DNA测序的角度对其进行了鉴定。确定其为蜡伞科(Hygrophoropsidaceae)、拟蜡伞属(Hygrophoropsis)蘑菇。1材料和方法1.1材料2012年7月22日采集子实体于天津市宁河县七里海淮淀芦苇地。选取形态完整、新鲜、菌肉肥厚、七八成熟、未被昆虫啃食的子实体，用铲连同基物一齐采

3、下，详细记录子实体形态特征。挂上号牌，用吸水软纸折成漏斗状，菌柄向下包好，放入标本盒内，送往中国科学院微生物研究所进行科属鉴定。实物标本保存在天津农学院菌物标本室和中国科学院微生物研究所菌物标本馆。1.2方法1.2.1形态特征描述按常规方法观察子实体的形态结构，并测量菌盖直径以及菌柄长度、直径等；菌褶徒手切片，在显微镜下观察胞子的形态、色泽和大小。1.2.2基因组DNA提取取测试菌株，外部清洁后，掰开子实体，取里面未受污染的部分，液氮研磨处理后分装，-80£超低温冰箱保存备用［3-4］o取0.2g左右研磨好的样品，按参考文献

4、［3,5-6］采用KI法对基因组DNA进行提取。然后将提取的DNA保存于-20°C备用。1.2.3rDNAITS序列的扩增、克隆、测序及序列比较采用通用引物LR0R和LR5扩增核糖体大亚基(nrDNA-LSU)Dl〜D2区段，测序、BLAST比较［7-9］oLR0R：5'-ACCCGCTGAACTTAAGC-3'LR5：5'-TCCTGAGGGAAACTTCG-3'序列测定由北京诺赛基因组研究中心有限公司完成。2结果与分析2.1形态特征子实体中等大，菌盖直径3.0〜9.5cm,幼时稍扁平，成熟后呈下凹状，表面柠檬黄色，中部色

5、稍深，边缘内卷，光滑。菌肉黄色。菌褶黄色，稍稀，延生(图1)。菌柄长2.5〜6.0cm,粗0.5〜1.4cm,圆柱形，向下稍粗，污黄色,内实。胞子无色，光滑，椭圆形，2.6〜4.3umX5.1〜7.7umo夏季群生或单生于芦苇丛中地上。2.2rDNAITS序列测序结果包括核糖体大亚基D1〜D2区的大部分序列。从核糖体大亚基D1〜D2区序列比较分析，其序列与属于黄拟蜡伞(Hygrophoropsisaurantiaca)的28SrDNA(NCBI号码AY586659.1)序列相似率为93%。3结论与讨论最早关于苇蘑的报道是新疆

6、王秀云等［1］描述发现的苇蘑胞子为印褐色。2005年吕绍生［2］报道苇蘑这一蘑菇名称,拉丁文为AgaricusCampestrisoAgaricusCampestris为伞菌属蘑菇［10-11］,胞子褐色，光滑，椭圆形［11］。笔者采集的苇蘑经显微鉴别，发现匏子为无色，光滑，椭圆形。拟蜡伞属黄拟蜡伞蘑菇子实体小型至中型。菌盖初期边缘内卷，中央部位凹陷，后期稍平展。表面平滑，橙黄色，干后橙红色，边缘往往浅色。菌肉薄，白色或黄白色，有香味。菌褶橘黄色，延生，密，窄，有横脉。菌柄淡褐色,基部有短绒毛，胞子无色，光滑，椭圆形，胞子印

7、奶油色,未见囊状体。菌丝具有锁状联合[12-13]o结合标本形态特征发现其也具有上述类似特征。从核糖体大亚基D1〜D2区序列比较分析，并结合标本形态特征，鉴定其为拟蜡伞科(Hygrophoropsidaceae)、拟蜡伞属(Hygrophoropsis)蘑菇。致谢：苇蘑鉴定由中国科学院微生物研究所文华安研究员协助完成，特此表示感谢。参考文献：[1]王秀云，孔爱琴.博斯腾湖野生苇蘑调查[J].干旱区研究，1987(4)：62-63.[2]吕绍生.天津七里海生物集[M].北京：中国林业出版社，2005：5-6.[3]杨振华，张靠

8、稳，马爱瑛.贺兰山紫蘑菇基因组DNA提取方法研究[J]・安徽农业科学，2010,38(20)：10557-10559.[4]张靠稳，杨振华，刘建利，等.四种贺兰山紫蘑菇rDNAITS序列分析[J].生物技术通报，2011(12)：88-91・[5]黄龙花，杨小兵，张智，等.基于ITS序列分