白芨组织培养实施方案设计

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1、白及组织培养实施方案一、白及简介白及为兰科白及属多年生草本植物，又名甘根、连及草、地螺丝、羊角七、鞭口药、利知子、刀口药、鱼眼兰等。分布在中国、日木以及缅甸北部，主产于贵州、四川、湖南、湖北、安徽、河南、浙江、陕四等地。其味苦、甘、涩，性凉,归肺、胃、肝经。以块茎供药用，能收敛止血，消肿生肌；治肺结核咳血，支气管扩张咯血、胃溃疡吐血、尿血、便血等症。外用治外伤出血、烧烫伤、手足較裂等症。块茎含黏液质和淀粉等，可作糊料，在生物医药、保健食品、纺织印染、特种涂料和日用化工等方而有巨大的商业利用价值。又因白及为地生兰的一种，花开艳丽，被

2、作为庭院、居室及园林景观绿化苗木大量应用。白及一般生于海拔110——3200m的山野、山谷较潮湿处或林下半遮阴地带,喜温暧、稍阴湿的环境，耐阴性强，忌强光直射，需排水良好、富含腐殖质的砂质土壤，稍耐寒，冬季可在地下越冬。白及能产生大量的种子（每个葫果10〜30万粒），但这些种子没有胚乳，自然萌发率极低，繁殖困难，但白及胚的薄壁细胞贮存大量的蛋白质、油脂和碳水化合物，可作为种子萌发的营养成分，因此白及种子在保湿的情况下可以萌发，是兰科植物中种子易萌发的类型。传统的白及繁殖方法大多以分株为主，即将块茎分成小块种植，但繁殖系数低，大面积

3、发展对种源消耗大，不宜推广且难以满足市场需求。采用白及组织培养可在短时间内大量获取种苗，且成本相对较低，是提高白及产量的强有力措施。目前，国内研究资料报道的白及组织培养方法各异，所采用的外植体各不相同，且培养基及其中所加的植物生长调节剂种类和规格也千差万别。二、白及组织培养技术路线参照植物组织组织培养获得再生植株的方式，可通过4种途径获得口及再生植株：一是由愈伤组织形成不定芽再生植株；二是愈伤组织产生胚状体而再生植株；三是由侧芽或顶芽再生植株；四是由茎尖产生原球茎而再生植株。4种方式各有利弊，传统认为采用侧芽或顶芽发育途径获得的后

4、代性状较稳定，但因为白及原球茎带有大量共生菌，组培过程中容易岀现污染。结合卢氏当地实际，探索采用白及无菌播种的技术路线，通过不同浓度和培方的培养基实现白及组织培养的最佳技术路线，建立白及快繁体系。白及组织培养完整的技术路线如下：经过试验优化后的技术路线为：白及f种子（采集优质种源茹果）f表面消毒一无菌播种（MS培养基等）一原球茎（分化诱导）一白及小苗（分株、扩繁）―壮苗生根（炼苗）一完整小植株一炼苗20-25天一移栽一白及三、实验准备：种子：白及的葫果中有大量的种子，并且葫果的消毒较方便，污染率低。另一方面用种子作为外植体操作较容

5、易，并且组培过程中萌发率高，培养的幼苗生长较为迅速，因此，种子作为外植体应用比较广泛，大部分的组培研究都选用种子。本实验选取卢氏本地优质白及（BletillastriatafThunb.）Reichb.f・）朔果，采收时间为8刀下旬至9月中旬，此时间段胚龄大约为第8周至第22周。器材：高压灭菌锅、超净工作台、电子分析天平（精度为千分之一）、电磁炉、接种消毒器、高效能培养架、医用小推车、日光灯、加湿器、紫外灯、晾瓶架、酸度计（或PH试纸）、试管、容量瓶、胶头滴管、试剂瓶、烧杯、试管架、量筒、玻璃漏斗、移液管、三角瓶、广口培养瓶、称量

6、纸、毛刷、洗耳球、塑料筐、无菌脱脂棉、无菌滤纸、酒精灯、喷壶、橡胶手套、医用白大褂、紫外灯、锡子、接种针、剪刀、解剖刀、器械架、接种托盘等。（1）通用器械①烧杯：用来盛放、溶解化学药剂等。常用的规格有50mL、100mL>250mL.500mL>lOOOmLo②烘箱：用来烘干器械。③恒温水浴：用来溶解琼脂等物质。④玻璃搅拌棒：用来配制培养基。⑤洗耳球：用来辅助吸取、转移少量液体。⑥冰箱：用来贮存化学药剂、植物材料等。⑦牛角勺：用来转移化学药剂。⑧玻璃漏斗：用来过滤溶液。⑨剪刀：用来修剪外植体或剪切嫩茎。⑩器械架：在无菌操作期间用来

7、放置灭菌的器械。（2）各种盛具①拯瓷浅盘：用来承载各种器械容器。②塑料盆：用于清洗培养容器。③铁丝筐：用来盛放灭菌容器等物品。④纯水水桶：用来存放去离子水或蒸镭水。常用的规格有10L、20Lo⑤塑料桶：用來存放洗涤溶液、废弃溶液。⑥各种规格的磨砂玻璃瓶：用来盛放培养母液，以及各种植物生长物质。（3）计量器械①量筒：用来量取一定体积的液体。常用的规格有25mL、50mL.lOOmL.500mL.lOOOmLo①容量瓶：用来配制标准溶液。常用的规格有50mL.lOOmL.500mL、lOOOmLo②大肚移液管：用来吸取定量溶液。常用的

8、规格有lmL、5汕、10mLo③刻度移液管：用来吸取定量植物生长物质溶液。常用的规格有lmL、5mL.10mL(或可用移液器替换)。④移液管架：用来放置、固定移液管。⑤酸度计：用来检测培养基的pH。⑥药物天平：用來称取配制培养基的药品。⑦分析天平：