蛋白质测定不确定度分析

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1、食品中蛋白质含量测量结果不确定度评定依据JJF1059-1999《测量不确定度评定与表示》、CNAL/AG06《测量不确定度政策实施指南》和CNAL/AR11《测量不确定度政策》分析1.测定方法按照国家标准GB5009.5-2010《食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》中规定的第一法，即凯氏定氮法进行测定。检测原理为：含氮有机化合物，与硫酸一同加热消化，使蛋白质分解，分解产生的氨与硫酸结合生产硫酸铵，然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后，再以盐酸标准溶液滴定，根据盐酸的消耗量乘以换算系数即测得蛋白质的含量。检验过程如下：1)称取样品：用精度为0.1mg的精密电子天平称取0.2～2g样品，称准

2、至0.1mg；2)消解：加入0.2g硫酸铜、6g硫酸钾、20ml硫酸加热消解至完全；3)定容：消解液冷却后，加水定容至100ml；4)蒸馏：吸取5.00ml样品处理液于蒸馏反应室内，加10.0ml氢氧化钠溶液（400g/L），硼酸溶液接收；5)滴定：以0.1mol/L的盐酸标准溶液滴定接收液至终点。称取样品样品消解标准溶液配制处理液蒸馏接收液滴定测试结果2.测量流程方框示意图3.蛋白质含量的计算式中：X——试样中蛋白质含量，单位为克每百克（g/100g）；V1——试样消耗标准溶液的体积，单位为毫升（ml）；V2——试剂空白消耗标准溶液的体积，单位为毫升（ml）；V3——吸收消化液体积，单位

3、为毫升（mL）；m——试样质量，单位为克（g）。4.不确定度的来源计算蛋白质含量不确定度的来源及有关量值见下表：温度：22℃湿度：50%RH参数XU（x）U（x）/xrep14.020.00710.05%1.860.000450.60%0.09986/0.8%1000.015700.01570%（移液管）10.000.00530.05%（滴定管10.000.00600.06%0.50.05770.00535%4.1测量重复性带来的不确定度分量（含人员、环境、测量方法和仪器重复性等其他分量的贡献），用凯氏定氮法对样品（编号：1036）进行2次重复测定,有关数据及结果见表1表1食品中蛋白含量两

4、平行样测量原始记录及结果m/(g)V1/(ml)V2/(ml)(V1-V2)/(ml)X1.05801.850.021.8314.021.09771.920.021.9014.03平均数1.0778//1.8614.02s(xi)==0.00710.05%4.2样品扣除试剂空白后消耗盐酸标准溶液带来的标准不确定度10ml滴定管的标准不确定度来源：①滴定管的不确定度，允差为±0.2ml，按均匀分布换算成标准不确定度：②滴定体积的重复性以通过重复性实验考虑过了，包含在内③滴定管和溶液的温度与校正时温度不同引起的体积不确定度u2：本次实验温度为22℃，水的膨胀系数为2.1×10-4，假设温度变化

5、按均匀分布，换算成标准不确定度0.00045ml=0.012；0.06%4.3标定盐酸标准溶液标准带来的标准不确定度①标定盐酸用基准碳酸钠纯度为100%±0.05%，按均匀分布转换成标准偏差：=0.0005/√3=0.00029②基准试剂称量的相对不确定度，天平的准确度为σ＝0.01mg，平均称样量为0.20682g，采用矩型分布计算标准不确定度：；0.003%③标定时50ml滴定管引入的相对不确定度分量公差为±0.04ml，平均滴定体积为39.06ml，按矩形分布0.6%①滴定管和溶液的温度与校正时温度不同引起的体积不确定度：盐酸标定时实验温度为25℃，平均滴定体积为39.06ml，水的

6、膨胀系数为2.1×10-4，假设温度变化按均匀分布，换算成标准不确定度0.024ml；=0.6%⑤测量重复性带来的不确定度分量为0.1%（含人员、环境、测量方法和仪器重复性等其他分量的贡献）0.8%4.4用10ml移液管移取样品消化液带来的标准不确定度10ml移液管公差为±0.02ml，按矩形分布。温度校正0.0045ml=0.0053；4.5用100ml容量瓶定容带来的标准不确定度100ml容量瓶公差为±0.08ml，按矩形分布。；温度校正；0.0157%4.6用10ml滴定管带来的标准不确定度移液管校准温度校正；4.7样品称量带来的标准不确定度天平的准确度为σ＝0.1mg，采用矩型分布

7、计算标准不确定度。5合成标准不确定度及结果表示0.05%扩展不确定度：取包含因子k=2（95%置信区间，则U=2×UC=2×0.0071=0.0142g/100g则该样品蛋白质含量为14.02±0.01g/100g（取小数点后两位数字）编制审核