题目-UROP复旦大学本科生学术研究资助计划

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1、复旦大学上海医学院曦源项目结题报告乙型肝炎病毒X蛋白鼠单克隆抗体的制备与应用项目参与：周谢颖0556242张倩倩0530020指导老师：叶荣副教授实验室：BSL3生物安全实验室序3摘要4、八—I—厂刖吕5第一章乙肝病毒鼠单克隆抗体的制备材料7方法与结果讨论7第二章X蛋白真核细胞中表达及形态学研究材料12方法与结果讨论12小结与体会14参考文献15体会与提高16致谢17序我们的曦源主题，源于导师组叶荣老师的启发，然后便在许多的如意和不如意中进行至今。我们的小组名义上为三人，事实上却几乎是一个完整的导师组。除去周鑫、谢颖、张倩倩之外

2、，他们还有蔡加君、范旻浩、彭一鸣、陈鹏里——每一个人都来自05级临床医学八年制的大集体。一个专业性质的科研项目，对于临床和基础外围的尚称不上专业的我们，毫无疑问充满了挑战，时间的安排也显得十分重要。在接近一整年的时间里，课业是紧的，课余时间是少的，组员们却很努力很自觉地为实验留出了时间。由于项目分为两个部分进行，组员也分两拨，按照各自的进度调整安排。在五个周日的晚上，一般每组安排两个人实验，分阶段轮替。组员之间会交代实验的进度，并附有详细的实验记录以便参考。这种相互讨论与询问的方式一直延续至今。为我们提供实验场所、器材和最宝贵的

3、专业知识技能辅导的是叶荣老师所在的三级生物安全实验室（BSL）,叶荣老师及他带领的杨金华、韩文东、丁悦娜、孙志平等各位学长在一年里始终给予着我们莫大的信心和帮助。从实验的原理、仪器的操作和试剂的选用到结果的分析，在老师和学长的倾力相助下，我们对各种分子生物学理论和实践的认识逐渐在提升。对一些关键部分，叶老师和学长亲自示做，以保证结果的可靠性。实验经费方而，由于分子生物学实验中涉及的试剂多而昂贵，我们的经费部分来自曦源项口的资助，部分则由叶荣老师所在的实验室提供，其屮包括了现有的仪器使用、试剂和相关器材的购买等。感谢这一切，让我们

4、从门外汉变成了初窥科研一斑的新人。乙型肝炎病毒X蛋白鼠单克隆抗体的制备与应用摘要乙肝病毒(HBV)X蛋口单克隆抗体的制备有赖于抗原表位特性及其载体的构建，木实验通过双酶切、PCR、连接、转化等分子克隆学技术，建立了三个含不同拷贝X基因片段、不同特性的原核表达载体(PET22b-HBX-A,PET22b・HBX・B,PET22b-HBX-C)；该载体在BL21屮表达产物经SDS-PAGE分离纯化后免疫BALB/c小鼠，提取血清；免疫后小鼠脾脏细胞与Sp2/0-Agl4骨髓瘤细胞融合；通过WesternBlot以小鼠血清多克隆抗体检

5、测表达的X蛋白。本实验还构建了X蛋口的真核表达载体pcDNA3.1・HBx,旨在真核细胞屮探讨其表达的X蛋白对细胞功能形态的影响，并结合制备的抗体进行抗原检测。关键词HBV,X蛋白，X基因，原核表达载体，真核表达载体，单克隆抗体(McAb)oAbstractThecharacterofmonoclonalantibodies(McAb)againstXproteininhepatitisBvirusdependsonformationoffineexpressionvectors-Basedonthis,thisstudyest

6、ablishedthroughmolecularcloningtechniquesaseriesofprokaryoticexpressionvectorswhichcontaineddifferentcopynumbersofXgene(PET22b-HBX-A,PET22b-HBX-B,PET22b-HBX-C).ExpressionproductsofthevectorsinBL21weresegregatedandpurifiedthroughSDS-PAGE,thustobeemployedinimmunizingBA

7、LB/cmicethroughwhichweacquiredserumcontainingmulticlonalantibodies.Acellfusionwasmadeofmyelomacells(Sp2/0-Agl4)andspleniccellsattractedfromimmunizedBALB/c.ThemulticlonalantibodieshadbeenappliedindetectingXprotein.AneukaryoticexpressionvectornamedpcDNA3.1-HBxwasestabl

8、ishedaswell,bydoingthisthestudyintendedtomonitorthemorphologicalandfunctionaleffectsofXproteinoneukaryoticcells.KeywordsHBV,Xprotei