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1、作业一：一、名词解释：1、基因：是遗传的物质基础，是DNA(脱氣核糖核酸)分子上具有遗传信息的特定核甘酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。2、基因纟I［该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子3、操纵子:原核生物的儿个功能相关的结构基因往往排列在一起，转录生成一个mRNA,然后分别翻译成儿种不同的蛋白质。这些蛋白可能是催化某一代谢过程的卿，或共同完成某种功能。这些结构基因与其上游的启动子，操纵基因共同构成转录单位，称操纵子。4、启动子:是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组
2、件，包括至少一个转录起始点。在真核基因屮增强子和启动子常交错覆盖或连续。有时，将结构密切联系而无法区分的启动子、增强子样结构统称启动子。5、增强子：是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是在SV40病毒中发现的长约200bp的一段DNA,可使旁侧的基因转录提高100倍，其后在多种真核生物，甚至在原核生物中都发现了增强子。增强子通常占100〜200bP长度，也和启动子一样由若干组件构成，基本核心组件常为8〜12bp,可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。6、基凶表达：是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗
3、传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子。二、简答题1、说明限制性内切核酸晦的命名原则要点。答：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则，即属名+种名+株名的各一个首字母，再加上序号.基本原则：3-4个字母组成，方式是:属名+种名+株名+序号；首字母：取属名的第一个字母,月.斜体大写;第二字母：取种名的第一个字母,斜体小写；第三字母：(1)取种名的第二个字母，斜体小写；(2)若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替•第四字母：若有株名，株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而
4、定，但用正体•顺序号：若衣同一菌株屮分离了儿种限制酶,则按先后顺序冠以1,11,111,…等，川正体.2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性？受哪些因素影向？答：II类限制嗨虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。条件的改变，限制酶的特异性就会松动，识别的序列和切割都有一些改变，改变后的活性通常称第二活性，而将这种因条件的改变会出现第二活性的酶的右上角加一个星号表示，因此第二活性乂称为星号活性。概括起来，诱发星活性的因素有如下儿种：(1)高甘油含量
5、(>5%,v/v)；⑵限制性内切核酸酶用量过高O100U/ugDNA)；(3)低离子强度(〈25mmol/L)；(4)^5pH(8.0以上)；(5)含有有机溶剂,如DMS0,乙醇等;(6)有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+,Cu2+,C02+,Zn2+等)。3、影响DNA连接酶催化连接反应的因索有哪些？答：(l)DNA的纯度(2)DNA甲基化的程度(3)酶切消化反应的温度(4)DNA的分子结构(5)核酸内切限制酶的缓冲液4、什么是Klenow酶？有哪些活性？在基因工程中有什么作用？答：Klenow酶是
6、1974年Klenow用枯草杆菌蛋白酶水解DNA聚合酶I,得到两个片段,其中大片段的分子量为75kDa,它具有5'-3'聚合酶和3'-5'外切核酸酶的活性,小片段具有5'-3'外切核酸酶活性。由于大片段失去了DNA聚合酶I中会降解5'引物的5'-3'外切核酸酶的活性，所以在基因工程中更有用。Klenow酶丄要有卜列川途：(1)修复反应，制备平末端可川Klenow酶修复限制性内切核酸酶或其他方法产生的5'或3'突出末端，制备平末端，这样可以使原来具有不相容的黏性末端的D7A片段通过平末端重组。如在反应系统中加
7、入放射性同位索标记的脱氧核甘酸，用这种末端填补的方法可以制备3'末端标记的探针。川Klenow酶修复5'突出末端的反应主要是利川了Klenow酶的DNA聚合酶活性，是填补反应；而修复3,突出末端则是用Klenow酶的3'-5'外切核酸酶的活性，是切割反应。用Klenow酶的切割反应來修复3'突出末端是不理想的，改用T4DNA聚合酶或其他的酶是更好的选择。(2)标记DNA3'突出末端(protrudingend)该反应分两步进行：先用3'-5'的外切核酸酶活性除去3'突出末端，产生3'隐含末端，然后在高浓度的
8、标记底物(-32p-dNTP)存在下，使降解(3'-5‘)作用与聚合(5'-3‘)作用达到平衡。这种反应也叫交换或取代反应(exchange/replacementreaction)o不过这一反应用T4DNA聚合酶的效果更好，因它的3'-5'外切核酸酶活性较强。(3)其他的一些用途：包括川双脱氧末端终止法进行DNA序列分析、川于cDNA第二链的合成、在定点突变中川于合成第二链、用引物延伸法(primerexten
