大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)酶联免疫分析

《大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)酶联免疫分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研允使用。检测范围：96T60

2、ng/mL-2000pg/mL使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本屮载脂蛋白Al(apo・Al)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠载脂蛋白Al(apo・Al)水平。用纯化的大鼠载脂蛋白Al(apo・Al)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入载脂蛋白Al(apo-Al),再与HRP标记的载脂蛋白Al(apo・Al)抗体结合，形成抗体•抗原•酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转

3、化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的载脂蛋白Al(apo-Al)S正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中大鼠载脂蛋白Al(apo-Al)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlX1瓶2酶标试剂6mlXl瓶8标准品(4000

4、ig/mL)0.5mlXI瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5mlXI瓶4样品稀释液6mlX1瓶10说明书1份5显色剂A液6mlX1瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlXl/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于・20

5、°C保存，但应避免反复冻融2.不能检测含MN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管屮进行稀释。2000pg/mL5号标准品150^1的原倍标准品加入150卩1标准品稀释液1000pg/mL4号标准品150(11的5号标准品加入150^1标准品稀释液500

6、ig/mL3号标准品150卩1的4号标准品加入150卩1标准品稀释液250

7、ig/mL2号标准品150)11的3号标准品加入150

8、11标准品稀释液125.5pg/mL1号标准品150^1的2号标准品加入150卩1标准品稀释液2.加样：分别设空白

9、孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50卩1,待测样品孔屮先加样品稀释液40卩1,然后再加待测样品10Pl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。1.温育:用封板膜封板后置37°C温育30分钟。2.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸镭水30倍稀释后备用3.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。4.加酶：每孔加入酶标试剂50卩1,空白孔除外。5.温育：操作同3。6.洗涤：操作同5。7.显色：每孔先加入显色剂A50pl，再加入显色剂B50yl

10、,轻轻震荡混匀，37°C避光显色15分钟.8.终止：每孔加终止液50j.il,终止反应（此吋蓝色立转黄色）。9.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：准备试剂，样品和标准品1计算计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的0D值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15・30分钟后方可使用，酶标包被板开

11、封后如未用完，板条应装入密封袋屮保存。2•浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。1.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样吋间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。2.请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本0D值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）。3.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。4.底物请避光保存。5.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.6.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按

12、传染物处理。7.本试剂不同批号组分不得混用。8.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存：；2-8°Co2.有效期：6个月