环境微生物第五章 微生物的生长及其控制(1)

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1、第五章微生物的生长及其控制1§5-1测量生长繁殖的方法2一、基本概念1、个体细胞的生长(growth)：一个微生物细胞在合适的外界环境条件下，会不断地吸收营养物质，并按其自身的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用大于异化作用，则其原生质的总量(重量、体积、大小)就不断增加，于是出现了个体细胞的生长。32、繁殖(reproduction)：当单细胞个体生长到一定程度时，由一个亲代细胞分裂为两个大小、形状与亲代细胞相似的子代细胞，使得个体数目增加，这是单细胞微生物的繁殖。这种繁殖方式称为裂殖。43、发育：微生物的生长与繁殖是交替进行的。从生长到

2、繁殖这个由量变到质变的过程叫发育。54、世代时间：细菌两次细胞分裂之间的时间。在一定的培养条件(如营养组成、pH、温度和通气等)下，它的世代时间是一定的；当环境条件发生改变，其世代时间也会改变。65、多细胞微生物的生长只是细胞数目增加，不伴随个体数目增加。如果不但细胞数目增加，个体数目也增加，则称为多细胞微生物的繁殖。76、研究微生物生长繁殖规律的重要意义微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下生理、代谢等状态的综合反应，因此：①有关生长繁殖的数据可作为研究多种生理、生化和遗传等问题的重要指标；②微生物在生产实践上的各种应用或是人

3、类对致病、霉腐等有害微生物的防治，也都与它们的生长繁殖或抑制紧密相关。8二、测生长量——适用于一切微生物测生长量直接法间接法测体积比浊法生理指标法粗放精确可用分光光度计法对无色的微生物悬浮液进行测定，一般选用450-650nm波段。生理指标法：最重要的如测含氮量法(一般细菌的含氮量为其干重的12.5％，酵母菌为7.5％，霉菌为6.5％，含氮量乘6.25即为粗蛋白含量)，另有测含碳量以及测磷、DNA、RNA、ATP、DAP(二氨基庚二酸)、几丁质或N－乙酰胞壁酸等含量的；此外，产酸、产气、耗氧、粘度和产热等指标，有时也应用于生长量的测定。称

4、干重9测浊度1011将一定量的菌液中的菌体通过离心或过滤分离出来,然后烘干(干燥温度可采用105℃、100℃或80℃)、称重。称干重举例：大肠杆菌一个细胞一般重约10–12~10–13g，液体培养物中细胞浓度达到2×109个/ml时，100ml培养物可得10~90mg干重的细胞。一般干重为湿重的10%～20%，而一个细菌细胞一般重约10-12～10-13g。该法适合菌浓较高的样品。1213三、计繁殖数计繁殖数只适宜于测定处于单细胞状态的细菌和酵母菌；1、适用范围：对放线菌和霉菌等丝状生长的微生物而言，则只能计算其孢子数。142、直接法指用

5、计数板(如血球计数板)在光学显微镜下直接观察细胞并进行计数的方法。此法十分常用，但得到的数目是包括死细胞在内的总菌数。1516改进:用特殊染料作活菌染色后再用光学显微镜计数。如:用美蓝液对酵母菌染色后，其活细胞为无色，而死细胞则为蓝色，故可作分别计数；又如:细菌经吖啶【ādìng,[acridine]一种无色晶状微碱性三环化合物C13H9N,存在于煤焦油的粗蒽馏分中,是制造染料和药物(如吖啶黄素和奎吖因)的重要母体化合物】橙染色后，在紫外光显微镜下可观察到活细胞发出橙色荧光，而死细胞则发出绿色荧光，因而可作活菌和总菌计数。173、间接法：

6、是一种活菌计数法。原理：依据活菌在液体培养基中会使其变混或在固体培养基上(内)形成菌落而设计的。最常用的是利用固体培养基上(内)形成菌落的菌落计数法(colony-countingmethods)。18平板菌落计数法：(1)适用范围：适用于各种好氧菌或厌氧菌。此法最常用，但操作烦琐且要求操作者技术熟练。19(2)操作方法：把稀释后的一定量菌样通过浇注或涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分散在琼脂平板上(内)，待培养后，每一活细胞就形成一个单菌落，此即“菌落形成单位”(colonyformingunit,cfu)，根据每皿上形成的cfu数

7、乘上稀释度就可推算出菌样的含菌数。20稀释平板法计算结果时，常按下列标准从接种后的3个稀释度中选择一个合适的稀释度，求出每克菌剂中的含菌数。(1)同一稀释度各个重复的菌数相差不太悬殊；(2)细菌、放线菌、酵母菌以每皿30～300个菌落为宜，霉菌以每皿10～100个菌落为宜。2122国外已经出现多种微型、快速、商品化的用于菌落计数的小型纸片或密封琼脂板。(3)商品化其主要原理是利用加在培养基中的活菌指示剂TTC－(2,3,5-氯化三苯基四氨唑)，它可使菌落在很微小时就染成易于辨认的玫瑰红色。23水中微生物测定24§5-2微生物的生长规律25

8、一、微生物的个体生长和同步生长除了特定的目的以外，在微生物的研究和应用中，只有群体的生长才有意义。因此，在微生物学中，凡提到“生长”时，一般均指群体生长。1、微生物的生长可分为个体微生物和群体