中国药科大学-色谱分析法概论(胡育筑)

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1、色谱分析法概论分析化学教研室色谱分析法概论1.概述2.色谱过程和术语3.色谱法发展趋势概述1.色谱法（chromatography)M.Tswett固定相：碳酸钙；流动相：石油醚试样混合物的分离过程也就是试样中各组分在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分配过程。一相固定不动，称为固定相；另一相是携带试样混合物流过此固定相的流体（气体或液体），称为流动相。概述利用各组分物理化学性质的不同，在流动相流经固定相时，由于各组分在两相间的吸附、分配或其它亲和力的差异而产生不同速度的移动，最终达到分离的目的。chroma（色彩）graphy（图谱

2、）chromatography（色谱法）定义：概述分离基础：差速迁移概述功能：可分离性质相似的物质应用：混合物的分离分析色谱法特点：概述20世纪初30-40年代50年代60年代柱色谱薄层色谱法（TLC），纸色谱法（PC）气相色谱法（GC）气质联用技术（GC-MS）70年代80年代高效液相色谱（HPLC）超临界流体色谱（SFC），毛细管电泳（CE）概述2.色谱法分类a两相所处的状态b分离机理c操作类型分类方法：（1）以两相所处的状态分类气相色谱：流动相为气体（称为载气）GC按固定相不同分为：气固色谱(GSC)气液色谱(GLC)液相色谱：流动

3、相为液体，也称为洗脱液或淋洗液。按固定相的不同分为：液固色谱(LSC)和液液色谱(LLC)。概述（1）以两相所处的状态分类流动相固定相类型液相色谱液固LS色谱液液LL色谱气相色谱气固GS色谱气液GL色谱(2)按操作形式柱色谱、平板色谱①柱色谱液-固吸附柱色谱法②平板色谱法（薄层色谱、纸色谱）概述柱色谱(Columnchromatography):HPLC,GCetc.平板色谱(Planarchromatography):TLC,PC概述(3)按分离机理色谱法分离机理不同吸附色谱分子排阻色谱分配色谱离子交换色谱(3)按分离机理吸附色谱法（a

4、bsorptionchromatography）分配色谱法（partitionchromatography）离子交换色谱法（ionexchangechromatography）空间排阻色谱法（又称分子排阻色谱法）（sizeexclusionchromatography）GLC┌─填充柱色谱法气相色谱法─GSC(GC)└─毛细管柱色谱法经典液相柱色谱法───LLC柱色谱法（LC）──LSC色谱法──IEC高效液相色谱法───SEC(HPLC)─LSC薄层色谱法(TLC)LLC液相色谱法平板色谱SEC(LC)纸色谱法（PC）└────毛细管电

5、泳法(CE)超临界流体色谱法(SFC)2.色谱过程和术语2.1色谱过程物质分子在相对运动的两相间，分配“平衡”的过程。其分离机制是差速迁移。例：顺反偶氮苯在柱中吸附解吸附，再吸附……2.2基本术语1.色谱⑴基线（baseline）：仅有流动相通过检测器系统时产生的信号的曲线。如图Ot线⑵峰高（h）：色谱峰顶点与基线之间的距离。如图B’A线⑶峰宽标准差（σ）：两拐点间距离之半。峰宽（peakwidth,W或Y）：通过色谱峰两侧的拐点作切线，在基线上的截距。如图IJ间的距离色谱过程和术语半峰宽（peakwidthathalfheight,W1

6、/2或Y1/2）：峰高一半处的峰宽。如图GH间的距离W=4σ，W1/2=2.355σW=1.699W1/22.保留值试样中各组分在固定相内的滞留状态，是主要的色谱定性参数。保留值通过实验测定，用时间或相应的流动相体积表示，称为保留时间和保留体积。⑴保留时间tR（min）⑵保留体积VR（mL）色谱过程和术语2.保留值⑴保留时间（retentiontime,tR)：从进样开始到某个组分的色谱峰顶点的时间间隔色谱过程和术语⑵死时间（deadtime,t0orTM)：不被固定相滞留的组分（流动相）从进样开始、通过色谱柱，到出现最大值所需要的时间。

7、色谱过程和术语⑶调整保留时间（adjustedretentiontime,t'R)组分由于和固定相作用，比不作用的组分在柱中多停留的时间色谱过程和术语2.保留值⑸死体积（deadvolume,V0)由进样器至检测器的流路中未被固定相占有的空间体积死体积大，色谱峰扩张，柱效降低⑹调整保留体积（adjustedretentionvolume,V’R)由保留体积扣除死体积后的体积⑹调整保留体积VR‘：保留体积与死体积之差，其本质为组分停留在固定相时所消耗流动相的体积与流动相流速无关和tR‘同属于色谱定性参数即：VR'是定值，tR'与FC成反比V

8、0和Vm、t0和tm的区别由进样器至检测器的流路中未被固定相占有的空间体积称为V0；固定相充满死体积所需的时间为t0。平衡时流动相在色谱柱中占有的体积用Vm表示，经过色谱柱所需时间用tm表示。