《绿脓杆菌终结》ppt课件

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1、化妆品中铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）的检测概述随着人们生活水平提高，化妆品成为美化人民生活的必需品。然而化妆品的生产流程以及适宜微生物生长的一些生境特征，如含有水分，蛋白质，氨基酸，pH等，均易造成化妆品的污染。某些病原微生物的污染可对人体健康造成危害，同时微生物污染会影响化妆品的质量，因此对化妆品进行微生物检验具有十分重要的意义。我国《化妆品卫生规范》对化妆品的微生物学质量规定如下：1.眼部化妆品及口唇等黏膜用化妆品以及婴儿、儿童用化妆品菌落总量<500cfu/ml(g)2.其他化妆品菌

2、落总数<1000cfu/ml(g)3.每克或者每毫升产品中不得检出粪大肠菌群、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌4.霉菌和酵母菌总数<1000cfu/ml(g)铜绿假单胞菌具有十分重要的卫生学意义：其在自然界分布甚广，空气、水和土壤中均存在，对外界抵抗力较其他细菌强，适宜在潮湿环境中生长，水分含量较多的化妆品易受其污染。该菌为条件致病菌，能引起人眼、耳、鼻、喉、皮肤的化脓性感染特别是烧伤、烫伤、眼部疾病患者被感染后，常使病情恶化，并可引起败血症。因此，对化妆品中铜绿假单胞菌的检验非常有必要。铜绿假单胞菌生物学特性1.形态染色革

3、兰氏阴性杆菌，有荚膜，单端有1到3根鞭毛2.培养特征需氧及兼性厌氧的，在普通培养基上生长良好，菌落大小不一，平均直径2mm～3mm，扁平，边缘不整齐，且常呈相互融合状态。在42℃条件下可以生长，可与类似菌区别。3.氧化酶阳性，能产生绿脓菌素，此外还能液化明胶，还原硝酸盐产生氮气。本次实验检测方法采用GB7918.4—87化妆品微生物标准检验方法绿脓杆菌。2007年1月1日开始执行的《化妆品卫生规范》也有介绍。实验目的1.掌握化妆品中微生物检测的意义。2.掌握铜绿假单胞菌的鉴定及生化特征。3.了解化妆品中铜绿假单胞菌检测的

4、基本过程及几种培养基的配置方法。实验原理铜绿假单胞菌为革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外还能液化明胶还原硝酸盐为亚硝酸盐产生氮气，42℃±1℃条件下能生长。检测流程化妆品的前处理接样于营养肉汤增菌，37℃，12h，140rpm培养分离培养，挑取培养物接于十六烷基三甲基溴化铵平板，37℃，18-24h染色镜检,生化试验配十六烷基三甲基溴化铵培养基（选择性培养基，大肠杆菌不能生长，革兰氏阳性菌生长完全受到抑制）配绿脓菌素测定用培养基，明胶培养基，硝酸盐蛋白胨水培养基，普通琼脂培养基特征性检验氧化酶绿脓菌素硝酸盐

5、还原明胶液化42℃生长试验试验产气试验试验试验取菌+1滴接菌，37℃接菌接菌接菌二甲基对24h+氯仿37℃24h37℃24h42℃24h苯二胺移出+盐酸紫红色（+）紫红色（+）有气体（+）溶解成液状（+）生长（+）不变色（-）不变色（-）无气体（-）未溶解（-）不生长（-）样品采集所采集的样品应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10ml。包装量小的样品，取样可以酌减。样品前处理及注意事项1.亲水性样品（水包油型）可直接用灭菌生理盐水稀释。

6、取10ml或10g样品加到90ml生理盐水中，制成1:10的稀释液。2.疏水性样品（油包水型）先在样品中加入液体石蜡混匀，再加吐温80使之均质化，最后加灭菌生理盐水稀释。制成1:10的稀释液。3.要中和化妆品中防腐剂的抑菌作用，培养基要提供高营养的成分。第一部分实验：分离培养从增菌培养液中挑取培养物，划线接种于十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上，置37℃培养18~24h，进行分离培养。第二部分实验染色镜检及五项指标试验一、革兰氏染色实验选择可疑菌落，革兰染色，在油镜下观察细菌的形态以及菌体的颜色。铜绿假单胞菌镜下形态图示：若

7、镜检为革兰染色阴性杆菌者则进行氧化酶实验二、氧化酶试验原理：有氧呼吸过程中，氧化酶（oxidase）在电子传送系统扮演重要角色，其可藉氧分子将已还原的细胞色素（reduced cytochrome）氧化，产生水或过氧化氢。好氧菌与部份兼性厌氧菌及微好氧菌均具氧化酶的作用，本实验有助于区分奈瑟氏菌属（Neisseria）、假单胞杆菌属（Pseudomonas）与肠道杆菌科（Enterobacteriaceae）前两者为氧化酶阳性(oxidase positive)，而后者为氧化酶阴性（oxidase negative）。方

8、法：取菌于白色滤纸片+1滴1%二甲基对苯二胺↓15~30s变红色（+）不变色（-）若为（+）则进一步进行绿脓菌素实验三、绿脓菌素实验：方法：2~3个可疑菌落→绿脓菌素培养基→37℃24h→3~5mL氯仿→振荡提取液呈蓝色→取液体于一新试管+1mL1mol/L盐酸结果判断：上层盐酸内变为红色为（+），不变色则为（-）。