中国知网查重免费入口

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4、业医学搜索引擎http://www.kkme.net/尿激酶型纤溶酶原激活剂和肝细胞生长因子联合基因治疗实验性肝纤维化--《第二军医大学》2003年博士论文尿激酶型纤溶酶原激活剂和肝细胞生长因子联合基因治疗实验性肝纤维化KKME---专业医学搜索引擎http://www.kkme.net/[研究背景及目的]肝纤维化(hepaticfibrosis)是肝脏对慢性损伤的一种修复反应，以细胞外基质(extracellularmatrix,ECM)在肝内过多沉积为特征。近年来，针对肝纤维化发生的各个环节，如抑制肝星状细胞(hepaticst

5、ellatecell,HSC)激活和增殖，减少ECM沉积以及促进肝细胞增殖等方面，设计许多基因治疗方案，为肝纤维化治疗提供了新的手段。KKME---专业医学搜索引擎http://www.kkme.net/尿激酶型纤溶酶原激活剂(urokinase-typeplasminogenactivator,uPA)是调控肝纤维化的重要物质。其活化的双链uPA(twochainuPA,tcuPA)结构可激活纤溶酶原转变为纤溶酶，纤溶酶不但能直接降解ECM，还可将以酶原形式分泌的非活性基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase

6、s,MMPs)裂解，切除约10kDa的片段使之转化为活性状态，活化的MMPs可以切割一种或数种ECM成分，抑制肝纤维化进程。多项研究结果显示，uPA基因删除小鼠可自发出现肝脏、肺脏及其它脏器间质中ECM过多沉积，诱发纤维化形成。KKME---专业医学搜索引擎http://www.kkme.net/肝细胞生长因子(hepatocytegrowthfactor,HGF)是肝细胞的强效促分裂剂，由α链(64kDa)和β链(34kDa)构成，通过与细胞膜表面特异性c-met受体结合，促进肝细胞增殖；此外，许多研究表明，HGF可以抑制HSC激

7、活和ECM合成，具有一定的抗肝纤维化作用。复制缺陷型腺病毒是基因治疗肝纤维化广泛使用的基因转移系统，该载体系统具有宿主范围广、可感染分裂期及静止期细胞、包装容量大、不发生整合、繁殖滴度高等优点，在基因治疗研究中得到广泛应用。传统构建重组腺病毒的方法繁琐低效，近年来，He等建立了在大肠杆菌内重组腺病毒的AdEasy~(TM)系统，借助细菌内高度有效的同源重组机制并利用抗生素筛选，在短时间内便可得到所需要的重组腺病毒；此外由于在重组同时整合了绿色荧光蛋白(greenfluorescentKKME---专业医学搜索引擎http://www

8、.kkme.net/protein,GFP)基因，可以直接观察转染和感染效率，大大方便了腺病毒的重组与鉴定。本研究选择HGF和uPA作为外源目的基因，利用AdEasy~(TM)系统分别构建表达HGF和非分泌型uPA的重组复制缺陷型腺病