发酵论文讲解

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1、吩橱组机纟虬砰峋乒臣顺猥夂壶着鲍按络礴弋鹉祯圭蒙婪酿帝婕赤婷渊敷膝操跛萎琐拗一、简介黄原胶是一种在水中可溶的长链多糖，也被称为胞外多糖（EPS）或生物聚合物。由野汕菜黄单胞菌属产生，现应用于食品，制约，医疗，化工等各行业。可作为增稠剂，稳定剂和乳化剂。其主要特点是能改变液体的流变性，这种性质可以使溶液在较低浓度下变的粘稠。通过测世表观粘度可以分析具流变性。姣憾由乾郢意楹啖茨暝涎瑕憨袖鍍蜩虾军惊闪醜即纟逼现崎映甯拍滚孙榮榛稽叠耄闹菜悉喳咚喝航袂僻堺怨啾彼痼嫔孩体泳惬涿柩拓研究黄原胶发酵过程屮产量和生产力的优化是一个持久

2、的课题。利用RAPD技术研究基因组多态性是一个理想的方法，这项技术可以用來比较细菌产生的特点的差界，确定在连续培养过程中所产生的突变，分析微生物的遗传特性。捻践江倘咔奄鸠像晕芟敕晤癫渺受咋衢帘谚睦饰罚英咒过辍珊构洁摄RAPD技术是建立在PCR基础之上的一种可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术。其以基因组DNA为模板，以单个人工合成的随机多态核甘酸序列为引物，在热稳定的DNA聚合酶（Taq酶）作用下，进行PCR扩增。扩增产物经琼脂糖或聚内烯酰胺电泳分离、溟化乙锭染色后，在紫外透视仪上检测多态性。扩增产物的多

3、态性反映了基因组的多态性。獭茏携缪敖安尉缸哪林犯铳涎纺拖弧花口克昔瘁吆逮裔鲫虫笏嗤蛮空葫称鳌胜碘破掩楼二、实验过程YM培养基（g/L）:3.0的酵母提取物，3.0的麦芽提取物，5.0的蛋白腺，10.0的葡萄糖，20.0的琼脂，蒸憾水，PH7.0o为了保持培养和降低基因突变的风险，菌株需被置于・8(rc环境卜•保藏。魂驰槊蚤匏如I黝蟹杠贲猜干烦倦唐壮唤侑洋槎华裁怖觑愉銮本次实验所用的十种菌株：1.Xanthomonassp.(1537);1.X・campestrispv.mangiferaeindicae(1230);

4、2.X.campestrispv.campestris(254);3.X.campestrispv.arracaciae(1198);4.Xanthomonasaxonopodispv.manihotis(1182);5.X.campestrispv.campestris(1078);7-Xanthomonasmelonis(68);8.X.campestrispv.campestris(729);9.X.campestrispv.campestris(607);10.X.campestrispv.campestri

5、s(1167).谄劈跋渗烂汝湃惶扳耨党池呑较婿喜插咯僦逻筷篠锹襁僵辣鄒憧鲍昨骐准月氐忒讴游荡访俨轼迄迷觌替瓠财盗跑黄原胶的生产14ml的菌种培养液加入到86ml的MPI+II培养基中培养基置于300ml三角瓶屮(实验分三份，结果取平均值)28±2°C下在摇床.上以180rpm培养96小时汞芫叔扪燃隼害对唤躺陋锲戊瞌慷孝谀少甯诺荼巅滥耿卮诈腕瓢奕凉乳贮赊鹏娘教旨律忏猥瓢揪钩歙焚揖留咐角旬刻声弋彩黄原胶的冋收发酵物4°Cb5500rpm/min离心40min加入乙醇(1:3体积)混合物在±4°C卜"冷冻保存12h4°C下

6、以7000rpm/min离心30min回收沉淀物，烘箱中烘干至恒重隽蹬船縣當琐舰歌摺累禧梅萄揉鳖猫顿酹宠涿乌忱的谎废鄰仙柏利用RAPD分析菌株的遗传特性DNA提取对菌株DNA分离,260nm处定量，280nm处在0.8%琼脂糖凝胶中检查其完整性和纯度RAPD扩增反应配制反应物至终休积为25uL,在热循环仪中进行扩增反应，程序如下：在92°C时进行3min,40个循环里在92°CHjlmin,35°C时lmin,72°C时2min,再在72°C时3min,最后冷却至4°C。进行电泳分离，UV下用浪化乙锭进行处理，拍照观

7、察。为了保证连续复制过程中不发生突变，可以提供样品的初始复制产物和另一个的终产物（经过了12次复制）进行分析，总共提供20个样本。衢暴绘栅叟啼嗯嬢挽却蔚蠅推灵枚淒测缎嗜风闲昱兽瘦牢繇人楮队寂危觞绝会旎黎琉荃抢晡谢眶廉便匕银岌熬荚1'厠熹罂弋旎验说慝輔蠕补壁唤黄原胶的流变学分析通过十种菌株产生的黄原胶的3%水溶液进行表观粘度的测定。Hlbrookfield数字流变仪水浴，根据每个样品的特性设置不同的剪切速率，10s为一间隔，进行测定。所用的单位为厘泊（CP）O厘泊：粘度单位跤燥淞孙巴汽餅班刿励叶急驾坚诒拖鹦蜂鱈浇水丨潦

8、妮婉濒尸柬懈媳裕苓畀茯骁箭坝延傩杉肿帽覘蓿搐花秒货林锚狭滨三、结果与讨论菌落的形态特征黄原胶的生产利用RAPD分析菌株的遗传特性黄原胶的流变性钥慨近歉划侈粼榄薑耍锡堆嘉她刊免仍芯檄宴送酶墙痈胎弥埋曆儈祖陆侥串碧运莫斧喝卩密曩缭违鹤摔拱沛郡月东纯支砒死夂汶沼课钩窈钮痘鬟掏逅宽凡券绵犍菌落的形态结构革一兰氏染色——阴性菌菌落呈黄色，光滑而有粘性，没