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1、专题能力提升练专题丄5现代生物科技专题第1讲基因工程（含PCR技术）和细胞工程（30分钟100分）1.（11分）（2017-成都二模）根据基因工程的有关知识，回答下列问题：世纪金榜导学号73414176⑴限制酶切割DNA分子后产生的片段,其末端类型有和（2）质粒运载体用EcoRI切割后产生的片段如下：AATTC……GG……CTTAA为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRI切割外还可用另一种限制酶切割j亥酶必须具有的特点是。（3）按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即DNA连接酶和DNA连接酶。（4）反转录作用的模板是
2、产物是。若要在体外获得大量反转录产物,常采用技术。⑸基因工程中除质粒外和也可作为运载体。（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是【解析】（l）DNA分子经过限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式——黏性末端和平末端。⑵载体若可与目的基因连接，则载体与目的基因应有相同的黏性末端，所以切割目的基因的酶切割产生的DNA片段末端应与EcoRI切割产生的黏性末端相同。⑶根据DNA连接酶来源的不同可以把其分为两类,一类来源于大肠杆菌，叫做EcoliDNA连接酶;另一类来源于T4噬菌体，叫做T4DNA连接酶。（4
3、）反转录是以RNA为模板，在反转录酶的催化作用下合成DNA的过程，是DNA生物合成的一种特殊方式。PCR技术是常见的扩增DNA的技术。⑸基因工程的载体包括动植物病毒、入噬菌体的衍生物和质粒等。（6）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱，不能作为基因工程的受体细胞，应先采用Ca2+处理大肠杆菌，使其成为感受态的细胞。答案:⑴平末端黏性末端（2）切割产生的DNA片段末端与EcoRI切割产生的相同⑶丁4E-coli（4）mRNA单链DNAPCR（聚合酶链式反应）（5）动植物病毒入噬菌体的衍生物（6）未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱1
4、.（12分）（2017-长沙二模）利用小鼠制备的抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体做成的〃早早孕试剂盒〃，检测早孕的准确率在90%以上请回答该〃单抗〃制备的有关问题：（1）在该〃单抗”的生产过程中，将作为抗原对小鼠进行注射。（2）从小鼠体内脾脏中得到了细胞，设法将鼠的骨髓瘤细胞与该细胞融合，再用特定的培养基进行筛选,选岀融合的杂种细胞，对该细胞还需进行培养和检测，经多次筛选，就可获得足够数量的符合需要的杂交瘤细胞，该细胞的特点是⑶若在体外大规模培养该杂交瘤细胞，需要采取一定的措施保证被培养的细胞处于的环境中,例如向培养液中加入一定量的抗生素等;为保证营养,在使
5、用培养基时，通常需加入血清、血浆等一些天然成分。需提供（气体），维持培养液的pH。（4）单克隆抗体最广泛的用途是用作o【解析】（1）生产抗人绒毛促性腺激素单克隆抗体，需要将人绒毛促性腺激素作为抗原对小鼠进行注射，使小鼠最终可以产生特异性抗体的B淋巴细胞。（2）生产单克隆抗体需要融合B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，可以从小鼠脾脏中获得B淋巴细胞。B淋巴细胞和骨髓瘤细胞诱导融合,要用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞。筛选出的杂交瘤细胞需进行克隆化培养和专一抗体检测，经过多次筛选撮终获得能产生所需抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能迅速大量繁殖,也能产生单克隆抗体。（3）
6、动物细胞培养的条件是无菌无毒，营养物质用合成培养基，同时添加动物血清或血浆。气体条件是氧气和二氧化碳，其中二氧化碳能维持培养液的pH。（4）单克隆抗体的用途有作为诊断试剂、用于治疗疾病和运载药物，其中最广泛的用途是用作诊断试剂。答案:⑴人绒毛促性腺激素（2）B淋巴选择克隆化抗体既能迅速大量繁殖,也能产生单克隆抗体（2分）（3）无菌无毒合成C02（4）体外诊断试剂（2分）1.（16分）（2017-全国卷□）几丁质是许多真菌细胞壁的重要成分，几丁质酶可催化几丁质水解。通过基因工程将几丁质酶基因转入植物体内,可增强其抗真菌病的能力。回答下列问题：⑴在进行基因工
7、程操作时，若要从植物体中提取几丁质酶的mRNAz常选用嫩叶而不选用老叶作为实验材料，原因是o提取RNA时，提取液中需添加RNA酶抑制剂，其目的是⑵以mRNA为材料可以获得cDNA,其原理是。G）若要使目的基因在受体细胞中表达，需要通过质粒载体而不能直接将目的基因导入受体细胞,原因是（答岀两点即可）。⑷当几丁质酶基因和质粒载体连接时ZDNA连接酶催化形成的化学键是(5)若获得的转基因植株(几丁质酶基因已经整合到植物的基因组中)抗真菌病的能力没有提高,根据中心法则分析,其可能的原因是【解析】⑴嫩叶相对于老叶,细胞壁较薄，较易破碎,容易提取几丁质酶的mRNA;
8、由于RNA酶可降解RNA,提取RNA时提取液中应添加RNA酶抑制剂，以防止所提取
