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时间:2019-10-02
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1、显微镜的使用•一、目的要求:•学习与掌握油镜的使用技术•二、原理及说明•微生物是个体微小、结构简单、肉眼无法看到的微小生命体。因此,我们要借助显微镜来进行观察。显微镜的种类很多,但基本构造可分为两大部分:一是机械装置,而是光学系统。(下面以普通光学显微镜为例)。操作步骤•1、机械装置由镜座、镜臂、镜筒与物镜转移器、载物台、移动器粗细调节器组成。•2光学系统由目镜、物镜、聚光镜、反光镜、光圈组成。•(1)目镜:装在镜筒的上端,一般各有8x、•10x、15x、16x等种不同的放大倍数的目镜。目镜只能把
2、物镜成的像再次放大,没有辨析能力。•(2)物镜:显微镜的物镜是由一组特殊的透镜组成。一般有低倍镜(10x)、高倍镜(40x)和油镜(100x),它们各有一定的放大率,不仅可以放大标本,而且有辨析能力。•低倍镜:它的视野的实际范围最大,易于发现目标,但不易看清微生物个体的形态。•高倍镜:搞倍镜视野的实际范围较低倍镜小些。可以看清个体较大的微生物个体或菌丝体形态,但个体较小的微生物以及其内含物和特殊结构也无法辨清。•油镜:一般在镜头上有黑圈或红圈表示的为油镜物镜,也有的以“OI”或“HI”字样表示,油
3、镜的镜面很小,工作距离很近。使用时,在载玻片和油镜物镜之间加上一低油(常用香柏油)(而使用低倍、高倍镜时,是隔以空气)。当光线通过载波片时,由于玻璃与香柏油的折射率相近,可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射,这样就可以增加照明度,是镜检物清晰(参见表1)。表1光线通过几种介质的折射率(n)比较:介空水石香玻质气蜡柏璃油油折1.01.331.471.5151.52射率R=0.5波长/N.AN.A=n.sina/2三、材料仪器1、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸2、枯草杆菌(Bacillussubtil
4、lis)菌株3、载波片、无菌水四、操作步骤:1、置显微镜于平稳的实验台上,镜座距实验台过沿约为一寸左右,镜检者姿势要端正。一般用左眼观察,右眼便与绘图或记录,两眼必须同时睁开,以减少疲劳。2、调光:一般采用散射光,如果光线弱时可用日光灯。•(1)低倍镜旋到镜筒下方,旋转粗调节器。•是镜头与载物台相距0.5cm。•(2)打开聚光器,使之与载物台同样高度。•(3)左眼看目镜,观察光源强弱,使全视野内均匀明亮。凡检查染色体标本时,光线就强,检查为染色标本时,光线不以太强。可通过扩大或缩小光圈、升降聚光器
5、,旋转反光镜调节光线。•3、低倍镜观察•待见标本必须先用低倍镜观察,因为低倍镜视野较大,已发现目标和确定检查位置•将待检标本置镜台上,用标本夹夹住,移动推动器,使观察标本处于接物镜正下方。眼由左侧水平测视显微镜平台,转动粗落选,使接物镜下降之距标本约0.5cm处由接目镜观察。然后慢慢地提升镜筒,直到视野内出现物像后,改用细调节器,•调节到物像清楚为止,认真观察标本各部位,找到目的物并将其移到视野中心,准备用高倍镜观察。•4、高倍镜观察•将高倍镜转正至镜筒正下方。在转换时,需用眼在侧面观察,避免镜头
6、与玻片相幢。从接目镜观察,再仔细调节光圈。使光线明亮度适宜。同时用粗调节器慢慢提升镜筒至出现物像后,改用细调节器调节至物像清楚为止。找到最适当于观察的部位区,移至视野中心,准备用油镜观察。•5、油镜观察•(1)、将油镜转至正下方,用粗调节器将油镜头升约距平台2cm。•(2)手执玻片标本,在镜检部位滴上一滴香柏,油•小心将此玻片进入显微镜平台。•3)小心下降镜筒:以粗调下降镜头,此时从侧面注视油镜慢慢浸在香柏油中,几乎与标本相碰,特别注意:不能将油镜头压在标本上,更不能用力过猛,否则不仅压碎玻片,也
7、会损坏镜头。•4)从目镜观察,进一步调节光线,使视野达到最高程度(全开虹彩光圈)。•5)用粗调节器将镜筒徐徐上升(此时不准下降镜筒)。直到视野出现模糊物像为止,然后再用细调节器校正焦距。如果油镜头已离开泽面而仍未见物像,用粗调节器将油镜升高距平台约2cm后,必须在从侧面观察,•将油镜下降重复,上述操作到物像看清为止。•6)用同样的方法观察各个待检染色体标本。并绘出形态图。•7)观察完毕,上旋镜筒,取出标本片之后,先用擦镜纸擦去镜头上的油,然后沾取少许二甲苯。擦去镜头上残留油迹,最后再用擦镜纸擦去残
8、留的二甲苯。勿用手或其他纸擦镜头,以免损坏镜头。用绸布擦镜显微镜的机械部分•8)将各部分还原,反光镜垂直于镜座、将物镜转成八字形在向下旋,同时把聚光镜降下,才可以镜入镜箱内。•注意事项:•1)取显微镜时,必须一手拿镜臂,另一手托住镜座,并保持镜身上下垂至切不可一只手提起,以免坠落和甩出反光镜及目镜。•2)使用油镜之前须如上述顺序,先用低倍镜找到被检物,然后转换成高被镜,将被检物观察的部位移至视野中心,然后转换油镜观察•3)由于油镜工作距离很短,因此用粗条路螺旋下降镜筒时,一定要从侧
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