FACSCalibur流式细胞仪操作维护规程

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1、FACSCalibur流式细胞仪操作维护规程1.目的规范流式细胞仪FACSCalibur操作维护规程，正确使用和维护仪器，保证检测工作顺利进行和设备安全。2.适用范围适用流式细胞仪FACSCalibur的使用操作。3.职责3.1操作人员按照本规程操作仪器，对仪器进行正常维护，并作使用记录。3.2保管人负责监督仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护和保养。3.3仪器管理人以及科室负责人负责仪器综合管理。4.操作程序4.1安全操作注意事项和特别提示：4.1.1该仪器必须有专人保管，使用前需通读仪器说明书。4.1.2严格遵守操

2、作规程，如仪器出现故障，应马上停止使用，并立即向保管人、仪器管理人以及科室负责人报告，严格按照单位有关制度实施，不得擅自“修理”，查明原因，处理后仪器保管人应及时做好故障情况及维修记录。4.2设备每日开机程序：4.2.1开启稳压电源、变压器，打开流式细胞仪电源。4.2.2开启其它周边配备电源，如打印机，开启计算机。4.2.3确认鞘液筒有八分满，废液桶近似空的，桶盖是旋紧的；所有管线及管路装置连接通畅，无扭曲、折叠。4.2.4将气压阀方向调在加压位置，用手感觉鞘液桶在慢慢鼓起。4.2.5排除液流过滤器中的气泡。4.2.6等待机

3、器预热5---10分钟后可开始实验。4.3设备质控程序：4.3.1试剂准备：4.3.1.1取试剂盒中的Unlabeled试剂，充分混匀，加一滴到装有1ml鞘液的试管中，混匀，标记为unlabeled。4.3.1.2取FITC、PE、PerCP、Unlabeled试剂，充分混匀，各加一滴到第二支装有3ml鞘液的试管中，混匀，标记为mixed。4.3.2上机操作：4.3.2.1按电脑桌面的FacsComp进入质控程序。4.3.2.2在出现的“Signin”窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息，计算机将保存这些信息；单击

4、“Accept”。4.3.2.3在试验选项中，选择Lyse/No-Wash(LNW)：免洗程序。4.3.2.4在CalibriteBeadsLotIDs中,根据每种颜色的beads所对应的LotIds，输入编号，此编号在Calibritebeads试剂盒内，打开新买的试剂盒，里面有一张橙色胶纸，取出贴在试剂盒的背面，标题是Calibritebeads™3BatchNO,选择FACSFlowSheath下的编号(右侧的编号)。APCLotID(此栏不能空，即使是三色校正试剂)。4.3.2.1在右侧的保存选项中文件会自动保存,路

5、径FacstationBDfileFACSCompDDMMYY,还可以单击“Location”改变文件保存路径。4.3.2.2按Run开始上样，在仪器面板上按RunHi。高速运行，速度不能低于400个细胞/秒，速度过低可在管中加一滴微球。4.3.2.3上第一管后，按Start键，仪器自动调节PMT,完成后窗口底部出现“PMTsetSuccessfully”,暂停5秒后自动进入下一个调节窗口。注意：速度不能低于400个细胞/秒，速度过低可在管中加一滴微球。4.3.2.4上第二管，单击Start，仪器开始自动调节补偿并进行

6、灵敏度测试。4.3.2.5完成后仪器会给出提示，最后软件给出一个SummaryReport。检查报告中的“Result”是否都PASS，如果有的没有PASS，检测原因。①是否试剂过期，②两个试管中的液体和鞘液桶中的是否相同,③仪器做月维护,完成后再重新做FACSComp仪器指控。4.3.2.6打印报告，退出FACScomp软件。4.4样本检测程序4.4.1.样本准备：4.4.1.1取TruCountTube，编号。4.4.1.2用反向加样法在Tube中加入50ul充分混匀的抗凝全血，注意血不要碰到试管底部的微球（Beads）

7、。4.4.1.1取20ul荧光抗体加入到管中，注意：不要碰到血。涡旋混匀，室温避光放置15min。4.4.1.2取出加入450ul1×FACS溶血素，充分混匀，避光放置15min。4.4.1.324小时内上机用MultiSET软件获取细胞进行检测，上机前应充分混匀。4.4.1.上机操作:4.4.2.1执行FACSCalibur开机程序，进入MultiTEST软件。4.4.2.2在出现的“Signin”窗口中输入操作者姓名、单位、领导姓名等相关信息，计算机将保存这些信息，单击“Accept”。4.4.2.3进入“Setup”窗

8、口：在“DataSource”对话框中选择“FromCytometer:AcquisitionandAnalysis”，在“EntryLevelFileNamePrefix”中选择“Samplename”；在“AutomaticSavingOptions”中选择“DataFile”、“La