鮸鱼微卫星标记的开发及筛选【毕业论文】

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1、目录本科毕业论文（20届）鮸鱼微卫星标记的开发及筛选专业：生物科学目录目录摘要IAbstractII引言1材料与方法31.1材料31.1.1仪器与设备31.1.2仪药品与试剂41.2实验方法51.2.1鮸鱼基因组DNA的提取51.2.2酶切51.2.3接头的制备与连接51.2.4鮸鱼基因组文库的建立61.2.5探针杂交和磁珠富集61.2.6富含微卫星序列的PCR产物及测序61.2.7微卫星PCR引物和电泳71.2.8聚丙烯酰胺凝胶银染8结果与分析92.1DNA提取结果92.2酶切及适宜基因组片段的获得102.3菌落PCR检测重组率112.4测序结果及其序列分析13讨论153.1测序结果及序

2、列分析153.2目标产物显色法的选取163.3PCR引物的优点17小结18参考文献19致谢21中文摘要摘要[摘要]为了初步研究鮸鱼（Miichthysmiiuy）的群体遗传结构，本实验采用富集文库法构建了鮸鱼的部分基因组文库，将鮸鱼基因组的DNA用MseⅠ酶酶切，回收后进行纯化，提取到300bp-1000bp左右大小的DNA片段，用生物素标记的简单重复序列作探针与其进行杂交，将杂交的复合产物结合到有链霉亲和素包被的磁珠上，经过一系列的洗涤程序，去除磁珠表面未含有微卫星的片段。然后，将吸附在磁珠上的片段洗脱，利用PCR仪扩增放大所得的有效片段，再进行克隆和测序，根据各个微卫星两端的保守序列设

3、计引物，就可以得到微卫星分子标记。根据自行分离得到的序列设计了44对引物，对舟山地区的鮸鱼进行群体遗传多样性分析，其中12对引物扩增出了清晰条带，即多态性高的目的片段。鮸鱼微卫星标记的开发和筛选等的研究工作可以为鮸鱼遗传种质资源分析及遗传进化的研究提供更加详细和深入的信息，在一定程度上还可以有效促进鮸鱼资源保护和鮸鱼人工养殖的可持续发展。[关键词]微卫星；鮸鱼；种群多样性；多态性；分子标记19Abstract[Abstract]PartialgenomiclibrarywasconstructedinordertostudythegeneticstructureofMiichthysmii

4、uy.Inthisexperiment,weisolatedmicrosatelliteDNAfromMiichthysmiiuygenomewiththismethod.MiichthysmiiuygenomicDNAwasextractedanddigestedwithrestrictionenzymeMseI.Fragmentsover300bpwereisolatedandpurifiedandthenligatedwithshortlinkers.ThisgenomicDNAwashybridizedwithabiotin-labeledmicrosatelliteprobe(C

5、A)13.Thehybridmixturewasincubatedwithmagneticbeadscoatedwithstreptavidin.Afterwashingtoremovethenon-SSRfragments,theelutedsingle-strandedDNAcontainstheselectedmicrosatelliteDNA.Fromtheprimersdesignedforthe44microsatelliteloci,12couldamplifyexpectedPCRproducts.Thedevelopingandscreeningofmicrosatell

6、itesinMiichthysmiiuywillprovidemoreinformationfortheresearchofhereditysourceanalysisandheredityevolution,alsobenefitsthefuturedevelopmentofMiichthysmiiuyprotectionandMiichthysmiiuyartificialbreedingtosomeextent.[Keywords]Microsatellite;Miichthysmiiuy;Populationdiversity;Polymorph;Molecularmarkers.

7、19引言鮸鱼（Miichthysmiiuy）属鲈形目（Perciformes）、石首鱼科（Sciaenidae）、鮸鱼属（Miichthys），为近海温水性底层鱼类，喜好栖息于多低质泥沙或者泥的海底[1]，在我国沿海均有分布，但以东、黄海较多。其肉味鲜美，营养丰富，深受国内外消费者的喜爱，尤其鳔俗称“鱼肚”，为高级滋补品，具有较高的食用和药用价值[2]。鮸鱼在我国主要产于沿海，不过在朝鲜、韩国和日本均有分布，作为我国的名