2.2动物细胞工程

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1、动物细胞工程动物细胞工程其中，动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞工程常用的技术手段动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合生产单克隆抗体烧伤病人的治疗通常是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植，但对于大面积烧伤病人来讲，健康皮肤很有限，请同学们想一想如何来治疗该病人？思考？取该患者的皮肤进行细胞培养,获得人造皮肤后再移植（一）、概念是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。（二）、原理细胞分裂增殖一、动物细胞培养(三)、动物细胞培养过程幼龄动物取

2、动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础剪碎组织的目的？胰蛋白酶处理的目的？（四）动物细胞生长特性细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑无毒、易于贴附。接触抑制接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。50代以后失去接触抑制接触抑制原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞，这个过程称为原代培养。传代培养：将原代细胞从

3、培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。3.培养过程：动物胚胎或幼龄动物的细胞、组织或器官细胞悬浮液→原代培养细胞株细胞系传代培养10代细胞50代细胞无限传代单个细胞胰蛋白酶加培养液剪碎细胞贴壁剥离分瓶部分细胞“癌变”，遗传物质改变，无限传代动物细胞培养不能最终培养成动物体接触抑制b.48h(10×40)a.4h(10×10)c.H2O2(10×40)d.药-H2O2(10×40)培养器皿超净工作台实验设备细胞培养箱倒置显微镜（五）、动物细胞培养条件1、无菌、无毒的环境（

4、添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等）3、温度和PH温度36.5+0.5度，pH7.2～7.44、气体环境O2和CO2（95%空气和5%CO2）1）恒定的温度:36.5±0.5℃维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度，模拟动物体内环境。大多哺乳动物细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃，偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力较对高温强，温度上升不超过39℃时，细胞代谢与温度成正比。2）PH：7.2-7.４当PH低于6或高于

5、7.6时的生长会受到影响，甚至死亡。用来检测PH的变化：红色--pH7.4，橙色--pH7.0，黄色--pH6.5，蓝红色--pH7.6，紫色--pH7.8。3)气体：95%氧气—5%CO2ＣＯ２有调节PH的作用。气体是人体细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。氧气参与三羧酸循环，产生供给细胞生长增殖的能量和合成细胞生长所需用的各种成分。开放培养时一般把细胞置于95%空气加5%二氧化碳混合气体环境中。4）营养—培养基：在保证细胞渗透压的情况下，培养液里的成分要满足细胞进行代谢所需要的各种营养，如包括

6、十几种必需氨基酸及其他多种非必需氨基酸、维生素、碳水化合物及无机盐类等。只有满足了这些基本条件，细胞才能在体外正常存活、生长。动物细胞的培养基一般分为天然、合成、无血清培养基几种，此外细胞培养还需要一些常用的溶液。合成培养基成分已知，便于对实验条件的控制。但与天然培养基相比，有些天然的未知成分尚无法用已知的化学成分所替代，因此，细胞培养中使用的基础合成培养基还必须加入一定量的天然培养基成分，以克服合成培养基的不足。最普遍的作法是加入小牛血清。思考与讨论1、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请

7、解释原因？2、用胰蛋白酶分散细胞，由此可说明细胞间的物质主要是什么成分？3、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？那将动物组织分散成单个细胞时要注意什么问题呢？4、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。主要是蛋白质(胶原蛋白等)。能，应注意时间的控制不能，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。6、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组织培养基有何独特之处？5、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？7、

8、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基2、成分中有动物血清等成块组织不利培养，分散了做成细胞悬浮液利于培养不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞的全能性细