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1、CIK细胞是人外周血单个核细胞经体外激活、培养后获得的一群同时表达CD3和CD56分子的异质细胞,兼有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点[1-2],其生物学特点为临床的肿瘤生物治疗提供了广阔前景。为探讨CIK细胞对肝癌患者术后生存期的影响,选择自2002年10月-2005年12月住院的肝癌患者进行临床观察,现报道如下。1 资料与方法1．1 临床资料 本组30例肝癌患者,男22例,女性8例,年龄(29～61)岁,中位年龄(42±216)岁。TNM分期:Ⅱa11例,Ⅱb14例,Ⅲb5例,均经CT、手术和病理检查确诊。
2、随机分为手术加CIK组(CIK组)12例和单纯手术组(对照组)18例,所有患者观察前1月未行抗肿瘤治疗,3月前未使用过免疫增强剂及激素类药物。1．2 主要试剂 PE标记鼠抗人CD4、CD8抗体,FITC标记鼠抗人CD25、CD3抗体,同型对照分别为PE标记鼠抗人IgG1免疫球蛋白,FITC标记鼠抗人IgG1免疫球蛋白均为美国公司产品。1．3 方法1．3．1 CIK细胞制备及回输[3-4] 抽取外周血20ml,利用密度梯度离心法分离并收集单个核细胞,用RPMI-1640完全培养基洗涤3次,调整细胞到1×106/ml,加入IFN-γ1000
3、u/ml,24h后加入rhIL-21000u/ml,anti-D3McAb50ng/ml,孵箱中常规条件培养,以后隔天换液同时补加rhIL-21000u/ml。培养21d收集细胞,经毒理、热原试验和细菌培养、真菌培养阴性合格后,回输细胞总数为116×1010,悬浮于含500g/L人血白蛋白生理盐水250ml内,分别于术前、术后分4次回输给患者。1．3．2 流式细胞仪检测 抽取清晨空腹静脉血2ml(EDTA抗凝),取不同荧光标记的单克隆抗体各20uL,分别加入100uL抗凝外周血,室温下孵育15min,加红细胞裂解液,PBS洗涤2次,用流
4、式细胞仪(BD公司)检测,Cellquest软件分析数据,记录阳性细胞百分率。1．3．3 观测指标及疗效判定 观测指标包括两组患者机体外周血淋巴细胞亚群(CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T)的免疫状态及生存期。1.4 统计学处理 运用SPSS8.0统计学软件对各组数据进行分析,免疫结果差异行t检验,两组生存曲线行Log-rank检验,P<0105有统计学意义。2 结果2．1 机体免疫状态 对照组和CIK组治疗后患者机体细胞免疫总体水平无统计学意义,但在亚细胞水平上免疫水平差异显著;CIK组治疗后患者体内诱导辅助T细胞(C
5、D3+CD4+T)及细胞毒性杀伤效应细胞(CD3+CD8+T)均比对照组增高,有显著性差异,见表1。2．2 生存期 随访2年,对照组和CIK组的生存率分别为16.67%和25%,中位生存时间分别为9个月和18个月,两组有显著性差异(χ2=3.876,P=0.049)(见图1)。3 讨论CIK细胞兼有T淋巴细胞强大的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性杀瘤作用,其杀瘤作用主要通过以下三个途径:在体内细胞因子作用下,CIK细胞大量释放具有细胞毒性的胞浆颗粒到胞外,直接破坏瘤细胞以达到溶瘤作用;活化的CIK细胞还可分泌多种细胞因子(IFN-γ、
6、TNF-α和IL-2等)调节免疫系统对瘤细胞杀伤起到调理作用;活化CIK细胞还可表达FasI从而诱导肿瘤细胞凋亡。本研究发现:肝癌患者手术治疗前、后联合给予CIK过继免疫治疗,患者体内肿瘤特异性免疫杀伤细胞水平明显增高,说明经过免疫强化后,患者体内免疫水平处在较高且平稳的免疫激活水平,有利于效应细胞联合化疗药物发挥对肿瘤细胞及术后残存癌细胞的杀伤作用,提高治疗效果[4-5]。经过联合治疗后患者近期死亡率明显下降,治疗后中位生存期可达18个月,表明联合免疫治疗在术后对患者体内瘤细胞增殖有明显抑制作用。应用CIK疗法可使肝癌患者外周血免疫细
7、胞增殖加强,增强其抗肿瘤免疫活性,延长肝癌患者生存时间。手术联合应用CIK治疗效果显著优于单纯手术治疗,可望为肝癌综合治疗提供新的方法。查看详细资料随着肿瘤对人类生存健康的威胁日益严重,应对肿瘤的治疗模式也发生着日新月异的变化,各种肿瘤治疗的新药物、新技术、新方法层出不穷,其中细胞生物治疗已经初露锋芒,成为肿瘤生物治疗中重要的发展方向。继淋巴因子激活杀伤细胞(LAK)、浸润肿瘤淋巴细胞(TIL)及CD3单抗激活的杀伤细胞(CD3AK)后,细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinducedkiller,CIK)的杀瘤作用日益受到重视。
8、CIK细胞最早是1991年由美国斯坦福大学SchmidtWolf等[1]首次报道。他们发现在多种细胞因子(γ干扰素、CD3单抗、白介素21和白介素22)作用下,外周血淋巴细胞可以被定向诱导并大量增值成为肿瘤
