副溶血性弧菌鞭毛蛋白FlaA的重组表达与多克隆抗体制备

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1、副溶血性弧菌鞭毛蛋白FlaA的重组表达与多克隆抗体制备王燕，夏雨，王周平(江南大学食品学院，江苏无锡214122)摘耍：副溶血性弧菌是广泛存在于水产品中的革兰阴性致病菌。鞭毛蛋白FlaA是副溶血性弧菌所特冇的蛋白并在其侵染宿主、引起宿主免疫反应过程屮起到重要作用，由鞭毛蛋白免疫动物得到的抗体可以作为检测副溶血性弧菌污染的探针。本研究通过分子牛物学方法构建了重组FlaA的农达载体pET28a-FlaA,经1PTG诱导获得FLaA的人量表达。该重组蛋口以可溶性蛋白形式存在，经Ni-NTA亲和柱纯化后对家兔进行免疫，得到浓度为24.32mg/mL、效价为1:1

2、25,000的FlaA抗体。通过间接EL1SA实验，测得该抗体与副溶血性弧菌反应的灵敏度为lE4cfti/mL,H该抗体与五种其它常见致病菌无明显交义反应。关键词：副溶血性弧菌；鞭毛蛋口；克隆农达；抗体制备中图分类号:TS201.6;TS201.2RecombinantexpressionandpolyclonalantibodypreparationofVibrioparahaemolyticusflagellinAWANGYan,XIAYu,WANGZhouping(SchoolofFoodScienceandTechnology,JiangnanU

3、niversity,JiangSuWuXi214122)Abstract:TheGramegativebacteriumVibrioparahaemolyticusisacommonpathogenicbacteriainaquaticproducts・FlagellinA,whichisauniqueproteininthisstrain,playsanimportantroleduringinfectionandinductionofthehostimmuneresponse・Theproductionofpolyclonalantibodyagai

4、nstFlaAproteincanbeusedasaprobeinV.parahaemolyticusfastdetection.TherecombinantplasmidpET28a-FlaAwasconstructedandtheFlaAwasexpressedwithinductionofIPTG.ThesolubleFlaAproteinwaspurifiedbyNi-NTAaffinitychromatographyandthepolyclonalantibodyagainstFlaAwaspreparedbyimmunningrabbit.T

5、hefinalconcentrationofFlaAantibodywas24.32mg/mLwiththetiterof1:125,000.TheresultofFlaApolyclonalantibodysensibilityis1E4cfu/mL.TheFlaApolyclonalantibodyshowednocross-reactionwith5otherkindsofpathogenicbacteria・Keywords:Vibrioparahaemolyticus;FlagellinA;recombinantexpression;prepa

6、rationofployclonalantibodyo引言副溶血性弧菌(Vibrio是一种革兰阴性嗜盐弧菌，广泛存在丁•鱼类、贝类等海产品中，是导致海水养殖经济动物弧菌病的主要致病菌。山于空运的发展，食用新鲜海产品的人群和地域在不断扩增，而由V.parahaemolyticus引起的食物中毒，人群暴露规模及发生规模呈明显上升趋势，已经高居微生物性食物中毒的首位⑴。对于该菌引起的感染进行免疫预防已冇了初步的尝试[2],而在监测相关产品特别是水产品中该菌的污染情况方面：传统的细菌检验方法耗时费力，获得结果通常需要几天的时间；以核酸为基础的多重PCR法和荧光定

7、量PCR法及核酸分子杂交法则需要昂贵的仪器；近年，山于检测时间短、灵敏度高、不需要复杂仪器，基于抗原抗体反应的免疫学检测方法受到了普遍关注。然而无论是ELISA双抗体夹心法还是免疫胶体金法都需要特杲性强、灵敏度高基金项目：教育部新世纪优秀人才支持讣划(NCET-11-0663),教育部酋士点博导基金(No.20110093110002)。作者简介：王燕(1988J,女，硕士研究生，营养与食品卫生学通信联系人：王周平(1974-),男，教授，营养与食品卫生E-mail:wangzp@jiangnan.edu.cn的抗体探针。在已报道的研究中，最为常见的是全

8、菌免疫多克隆抗体和致病因了TLH蛋白免疫多克隆抗体。日前，探究其他特异性更强、灵