有机实验开卷整理—钟长江

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1、实验二、氨基酸的纸层析一、实验目的1、学习并了解分配层析的原理；2、掌握纸层析法分离氨基酸的原理和步骤。二、实验原理纸层析法（paperchromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。纸层析法又称纸色谱法，是用滤纸为支持物，所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，纸纤维上吸附的水分是固定相，有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。将样品点在滤纸上（此点称为原点），进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进

2、行分配。由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。溶质在滤纸上的移动速率用比移值Rf值表示：Rf：=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离—I—思刨曹他卜V华『IRf二a/b在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。只要条件（如温度、展层溶剂的组成）不变，Rf值是常数，故可根据Rf值作定性判断。氨基酸无色，可利用萌三酮显色反应，将氨基酸层析点显色作定性、定量用。所有氨基酸及具有游离Q-氨基的肽与萌三酮反应都产生

3、蓝紫色物质，只有脯氨酸和密脯氨酸与萌三酮反应产生（亮）黄色物质。三、实验操作每组三个样品，需三根大试管。1.滤纸准备：在距纸一端距底部约2-3cm处用铅笔轻轻划一基线，在线上画一小点样的原点。2.点样：点样管吸取氨基酸样品点于原点（分批点完），点样斑直径约2nmi。3.展层：大试管中，加入5-10ml展开剂（可先把空白滤纸试放入试管中,估计展开剂的用量）。将点好样的滤纸，顶部悬挂在胶塞上，原点在下端，浸立在大试管内，进行展层。*注意滤纸要垂直；点样线要高于层析液面；滤纸不要贴到层析缸璧上；当溶剂前沿展至距滤纸上沿l-2cm时结束。4.显色：展层毕，取出滤纸，用铅笔记下溶

4、剂前沿，然后用热风吹干（或烘箱60°C）烘干。喷上萌三酮。电吹风吹干，蓝紫色斑点即显现。5.结果：用铅笔轻轻描出显色斑点的形状，并用一直尺度量每一显色斑点中心与原点之间的距离和原点到溶剂前沿的距离，计算各色斑的Rf值。结果与讨论1.纸层析法的原理是什么？纸层析法依据极性相似相溶原理，以滤纸纤维的结合水为固定相，而以有机溶剂作为流动相。由于样品中各物质分配系数不同，因而扩散速度不同，从而达到分离的目的。同时，运用萌三酮显色反应达到分离、鉴定氨基酸的目的。2・何谓Rf值？影响Rf值的主要因素是什么？试样经层析后可用比移值（Rf）表示各组成成分的位置（比移值=原点中心至色谱斑

5、点中心的距离与原点中心至流动相前沿的距离之比），在一定条件下某种物质的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关。只要条件（如温度、展层溶剂的组成）不变，Rf值是常数，故可根据Rf值作定性判断。实验项目四乙酸正丁酯的制备一、实验目的1、认识酯化反应原理，掌握乙酸正丁酯的制备方法。2、掌握共沸蒸馆分水法的原理和分水器（油水分离器）的使用。二、实验重点、难点1、重点：掌握乙酸正丁酯的制备方法。掌握共沸蒸馆分水法的原理和分水器（油水分离器）的使用。2、难点：掌握共沸蒸馅分水法的原理和分水器（油水分离器）的使用。三、实验学

6、时6学时四、实验原理酸与醇反应制备酯，是一类典型的可逆反应，为提高产品收率，一般釆用以下措施:1、使某一反应物过量；2、在反应中移走某一产物（蒸出产物或水）；3、使用特殊催化剂用酸与醇直接制备酯，在实验室中有三种方法。第一种是共沸蒸馆分水法，生成的酯和水以沸臃物的形式蒸出来，冷凝后通过分水器分出水，油层回到反应器中。第二种是提取酯化法，加入溶剂，使反应物、生成的酯溶于溶剂中，和水层分开。第三种是直接回流法，一种反应物过量，直接回流。制备乙酸正丁配用共沸蒸馆分水法较好。为了将反应物中生成的水除去，利用酯、酸和水形成二元或三元恒沸物，采取共沸蒸馆分水法。使生成的酯和水以共沸

7、物形式逸出，冷凝后通过分水器分出水层，油层则回到反应器中。五、仪器、试剂与装置仪器蒸俺装置玻璃磨口仪器、球形冷凝管、分水器、圆底烧瓶（50ml）、温度计（150°C）、锥形瓶（50ml）、烧杯（400ml）、电热套、分液漏斗、量筒（10ml、50ml）、电热套、铁架台、铁夹及十字头、铁圈、橡胶水管、天平试剂正丁醇仃1.5ml）、冰醋酸（7.2ml）、浓硫酸、10%碳酸钠溶液、无水硫酸镁、冰块、沸石、甘油、pH试纸装置六、实验步骤1、50mL圆底烧瓶中,加］1.5mL（0.125mol）正丁醇,7.2mL冰醋酸（0.125mol）和3〜4d