实验动物传染性犬肝炎病毒检测方法

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1、ICS65.020.30B44实验动物传染性犬肝炎病毒检测方法if中华人民共和国国家标准GB/T14926.58—2008代勢GB/T14926.58—20012009-03-01实施Laboratoryanimal—MethodforexaminationofInfectiouscaninehepatitisvirus2008-12-03发布中华人民共和检验检疫总局中国国家标准化管理委员会GB/T14926（实验动物》共54个部分，为不同微生物和病毒检测技术方法.本部分自实施之日起代荐GB/T14926.58-2001（实验动物传染性犬肝炎病澎检测方法》.本部分与GB/T14926.58

2、-2001相比主要技术差异如下：a）传染性犬肝炎是犬的主要烈性传染病之一，在我国犬群中广泛流行，是基础级犬和SPF犬的必检项目）b）“6结果判定”中增加了“6・3基础级犬群体免疫抗体合格率：免疫抗体合格率=（被检动物抗体阳性数/被检动物总数）X100%.基础级犬群体免疫抗体合格率大于等于70%以上可判为该犬群免疫合格”内容。本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口。本部分由全国实验动物标椎化技术委员会负责起草。本部分主要起草人：田克恭、贺争鸣、范薇。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：——GB/T14926.58—2001o实验动物传染性犬肝炎病毒检测方法1范圈GB/T14926的

3、本部分规定了传染性犬肝炎病滝（ICHV）的检测方法、试剂等.本部分适用于犬ICHV的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过GB/T14926的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注口期的引用文件,其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件•其鼓新版本适用于本部分。GB/T14926.50实验动物酶联免疫吸附试验GB/T14926.54实验动物血凝抑制试验3原理根据免疫学原理•采用ICHV抗原检测犬血清中ICHV抗体;或根据ICHV在一定的条件下，能凝集人“O”型红细胞，这种凝

4、集红细胞的能力可被特异性抗体所抑制的原理，检测犬血清中ICHV抗体。4主要试剂和器材4.1试剂4.1.1ELISA抗原4.1.1.1特异性抗原用ICHV感染MDCK细胞，接种3d〜4d后，当病变达+++〜++++（—阴性；+轻；+十中；+++重；++++严重，下同）时收获。冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上消液再经超速离心浓缩后制成ELISA抗原。4.1.1.2正常抗原MDCK细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片而获得的上消液.4.1.2血凝素ICHV接种MDCK细胞，培养3d〜4d,当病变达+++〜++++时收获培养物.冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液

5、分装后低温保存。4.1.3阳性血清ICHV实验感染或自然感染的犬血清。4.1.4阴性血清无1CHV感染、未经免疫的犬血清。4.1.5酶结合物辣根过氧化物爾标记羊或兔抗犬IgG抗体。4.1.6人“O”型红细胞.4.2器材4.2.1酶标仪。4.2.237-C培养箱或水浴箱。GB/T14926.58—20085检测方法5.1采用ELISA方法（见GB/T14926.50）进行血濟学检测。5.2采用HA1方法（见GB/T14926.54）进行血清学检测。6结果判定6.1基础级犬，接种疫苗后，经ELISA检测抗体效价大于等于1:160,或HAI检测抗体效价大于等于1:16判为合格.6.2SPF级犬，

6、不应进行疫苗接种，对阳性检测结果,选用同一种方法或另一种方法重试，如为阳性则判为阳性.6.3基础级犬群体免疫抗体合格率：免疫抗体合格率=（被检动物抗体阳性数/被检动物总数）X100%基础级犬群体免疫抗体合格率大于等于70%以上可判为该犬群免疫合格.7结果报告根据判定结果，作出报告。