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1、肺癌相关检测基因：p16基因异常甲基化检测：p16基因是一种新发现的抑癌基因,位于人体第9号染色体短臂上,其外显子编码的蛋白能直接抑制细胞的增殖与分化。业已证实,p16基因的失活与许多肿瘤的发生、发展关系密切。研究发现,在多种人体肿瘤细胞系中存在该基因的缺失、突变。且最易发生的是纯合缺失。有学者对人体原发肿瘤p16基因进行了研究,发现在肺癌组织中存在明显的p16蛋白表达缺失。p16基因编码的p16蛋白是细胞周期依赖激酶(CDK)抑制物,p16蛋白能特异性地与细胞周期D2/CDK4复合物结合。抑制CDK4活性,从而抑制细胞周期从G1(DNA合成前
2、期)向S期(DNA合成期)进展,从而抑制细胞增殖。因此,从蛋白质水平证实了p16基因失活与肺癌发生有关。1、PCR(MSP)法： MSP方法检测外周血血浆、痰液、BALF、胸腔积液以及活检组织中p16基因启动子的甲基化状态，对肺癌具有辅助诊断价值;联合不同标本检测p16基因甲基化能提高肺癌诊断的敏感性。聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。简单来说，这种技术，是一种DNA片段扩增技术，我们有时候需要检测某种目的DNA片段是否存在。但是该片段的量比较少，如果是直接检测，则不
3、容易检测出来。这个时候就需要采用pcr技术，在体外，比如EP管内，对这个DNA片段进行扩增。打个比方，就好比是一个喇叭，把一个很小的声音放大，我们就很容易听到一样。通过PCR扩增之后，我们要检测的那个DNA片段的数目被增大几百万倍，这个时候我们检测就很容易了。PCR扩增是指数级的p16甲基化28例肺癌组织DNA经过亚硫酸氢盐修饰后，检测出15例甲基化（53.57%），癌组织检测出7例甲基化（25.00%），两者之间的差异具有显著性意义。口腔癌相关检测基因：1、p53蛋白检测：p53基因是与人类恶性肿瘤相关性最高的肿瘤抑制基因,该基因定位于人第1
4、7对染色体短臂上。p53基因有多种抑癌功能,对细胞周期起负调控是其功能之一。但在内外致癌因素作用下,p53可发生突变,其功能丧失,突变的p53基因就具有了癌基因的特性,导致细胞生长失控。约60%NSCLC和80%SCLC可检测到p53基因突变,p53基因突变包括改变氨基密码的错义突变和其他引起mRNA剪接及引起基因缺失的改变。a、Westernblotting方法：WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。蛋白上样量为50μg2、p53基因检测：A、利用纳米金可以与蛋白和寡核苷酸等
5、生物分子进行结合等特点，将抗体蛋白和辣根过氧化物酶(HRP，通过寡核苷酸作用)标记到纳米金表面构建新型多功能纳米金探针，结合免疫磁珠探针，利用双抗体夹心ELISA原理构建高灵敏度、简单易行的p53蛋白检测体系。检测最低浓度：可检测到最低浓度为30pg/ml优点：过程简单,灵敏度高、重复性较佳,费用低廉,在临床微量蛋白检测中具有重要的应用价值B、基于金胶的选择性聚集实现p53基因的电化学超灵敏检测：利用金胶的选择性聚集实现信号扩增的超灵敏的电化学方法,用于人类p53肿瘤抑制剂基因的检测.在实验中,根据p53基因的序列设计了能特异性检测p53肿瘤抑
6、制剂基因的二段探针,在一段探针上固定磁性颗粒以捕获并富集目标基因,同时在另一段探针上标记金纳米颗粒作为检测信标.另外,通过硫代三聚氰酸和金纳米颗粒的自组装作用,形成金纳米颗粒和硫代三聚氰酸的网状结构,获得金纳米颗粒的选择性聚集,实现信号扩增.根据p53基因的序列,设计了两段与p53基因互补的探针,分别为DNAⅠ和DNAⅡ，将DNAⅠ固定在磁性纳米颗粒上,用于特异性地捕获和富集目标p53基因；在DNAⅡ上标记金胶,作为信标。在目标p53序列存在下进行杂交,形成双链结构,然后在反应中引入硫代三聚氰酸,其分子含有3个巯基,可与金纳米颗粒进行自组装形成
7、二维结构,通过硫代三聚氰酸和金纳米颗粒的自组装形成网状结构,实现金纳米颗粒的选择性聚集。每个目标p53DNA对应多个金胶作为信标,使得信号大大扩增；同时,在磁场的作用下,磁性纳米颗粒不仅起到分离作用,而且又可使检测物富集在电极表面,实现对目标p53基因的高灵敏度检测。最低检测限为2.24×10-17mol/L,C、用PCR-SSCP方法分别进行K-ras和P53基因突变分析即用于当某段DNA上有单个碱基对突变时（多见于遗传性疾病），先做PCR扩增该区域。然后在非变性的情况下跑胶。由于碱基对的突变，导致DNA的空间构型发生变化。在跑胶的过程中，突
8、变和非突变的条带的移动速度不一样。如果检测的样本同时和已知正常和已知患病的样本一起跑胶，则可以在不测序的情况下做出诊断。联合检测（当其中一个指标为阳性
