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1、选修3《现代生物科技专题》知识点总结专题1基因工程一、基因工程的基本工具1•“分子手术刀”限制性核酸内切酶邙艮制酶）（1）来源：主要是从原椅生物中分离纯化出来的。（2）功能：能够识别双链DNA分子的某种睦定的核背酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核昔酸之间的磷酸二曬键断开，因此具有专一性。（3）结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。2•“分子缝合针”一一DNA连接酶（1）两种DNA连接酶（E•coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶）的比较:①相同点：都缝合磷酸二酯②区别:E-coliDNA连接酶来源于大肠杆菌,只能
2、将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T』NA连接酶能缝合两种末端,但连接平末端的之间的效率较低。⑵与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核昔酸加到已有的核昔酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端,形成磷酸二酯键。DNA连接酶DNA聚合酶不同点相同点连接的DNA模板连接的对象作用实质化学木质咫链里链不要模板2个DNA片段坠模板单个脱氧核昔酸加到已存在的单链DNA片段上蛋白质3•“分子运输车”一一运载体（1）运载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。①具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片
3、段插入。(2)最①具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。常用的运载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外,并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。二、基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1•目的基因是指：编码蛋白质的结构基因。2.原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。3.PCR技术扩增目的基因（1）PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。（2）目的：获取大量的目的基因（3）原理：DNA双链复制（4）过程：第一步：加热至90〜95°C,DNA解链
4、为单链;第二步：冷却到55〜60°C,引物与两条单链DNA结合;第三步：加热至70〜75°C,TaqDNA聚合酶从引物起始进行互补链的合成。第二步：基因表达载体的构建1・目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传至下一代,使目的基因能够表达和发挥作用。2•组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因（1）启动子：是一段有特殊结构的DNA片段,位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA,最终获得所需的蛋白质。（2）终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。（3）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的
5、基因,从而将含有目的基因的细胞筛选岀来。常用的标记基因是抗生素基因。第三步：将目的基因导入受体细胞—1•转化概念：是目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。2.常用的转化方法:将目的基因导入植物细胞：釆用最多的方法是农杆菌转化法,其次还有基因枪法和花粉管通道法等。将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。方法的受体细胞多是僅精卵。将目的基因导入微生物细胞：原核生物作为受体细胞的原因是繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少，最常用的原核细胞是-大肠杆菌，其转化方法是：先用Ca"处理细胞，使其成为感受态细胞，再将重组表达载体DN
6、A分子溶于缓冲液中与感受态细胞混合，在一定的温度下促进感受态细胞吸收DNA分子，完成转化过程。3.重组细胞导入受体细胞后，筛选含基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达。第四步：目的基因的检测和表达1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因,方法是采用DNA分子杂交(DNA-DNA)技术。2.其次还要检测目的基因是否转录出niRNA,方法是采用DNA分子杂交(DNA-RNA)技术。3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质,方法是采用抗原一抗体杂交技术。4.有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如生物抗虫或抗病的鉴定等。专题2细胞工程一、植物细
7、胞工程1•理论基础(原理):细胞全能性全能性表达的难易程度：受精卵〉生殖细胞〉干细胞＞体细胞;植物细胞〉动物细胞2.植物组织培养技术(1)过程：离体的植物器官、组织或细胞一-愈伤组织一-试管苗一一植物体(2)用途：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生芒。地位：是培育转基因植物、植物体细胞杂交培育植物新品种的最后一道工序。3.植物体细胞杂交技术质悴睿產■朶种细胞脱分化•愈伤组织再分化■朶种植株（2）诱导融合的方法：物理法包括离心、振动、电刺激等。化学法一般是用聚乙二醇（PEG）作为诱导剂。（3）意义：克服了远缘杂交不亲和的障碍。
8、二、动物细胞工程1.动物细胞培养（1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关
