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1、1993年诺贝尔化学奖KarymullisandMichaelSmithPcr技术彭梦露制作PressRelease:The1993NobelPrizeinChemistry13October1993TheRoyalSwedishAcademyofScienceshasdecidedtoawardthe1993NobelPrizeinChemistryforcontributionstothedevelopmentofmethodswithinDNA-basedchemistry, withhal
2、fto DrKaryB.Mullis,LaJolla,California,U.S.A.,forhisinventionofthepolymerasechainreaction(PCR)method,andhalfto ProfessorMichaelSmith,UniversityofBritishColumbia,Vancouver,Canada,forhisfundamentalcontributionstotheestablishmentofoligonucleotide-based,sit
3、e-directedmutagenesisanditsdevelopmentforproteinstudies.IntroductionPolymerasechainreaction(PCR)hasrapidlybecomeoneofthemostwidelyusedtechniquesinmolecularbiologyandforgoodreason:itisarapid,inexpensiveandsimplemeansofproducingrelativelylargenumbersofco
4、piesofDNAmoleculesfromminutequantitiesofsourceDNAmaterial--evenwhenthesourceDNAisofrelativelypoorquality.PCRinvolvespreparationofthesample,themastermixandtheprimers,followedbydetectionandanalysisofthereactionproductsTheapplicationsofMullis'PCRmethodare
5、alreadymany.ItisforexamplepossibleusingsimpleequipmenttomultiplyagivenDNAsegmentfromacomplicatedgeneticmaterialmillionsoftimesinafewhours,whichisofverygreatsignificanceforbiochemicalandgeneticresearch.Themethodoffersnewpossibilitiesparticularlyinmedica
6、ldiagnostics,andisused,forexample,fordiscoveringHIVvirusorfaultygenesinhereditarydiseases.ResearcherscanalsoproduceDNAfromanimalsthatbecameextinctmillionsofyearsagobyusingthePCRmethodonfossilmaterial.原理简介：PCR技术的基本原理是DNA的半保留复制。由于DNA复制是半保留的，两条链都可以作为模板。在体
7、内，DNA复制是周期性的，所以基因扩增的数量有限；PCR技术在体外利用人工合成的引物，再加上DNA聚合酶和一些合适的底物和因子，通过对温度的控制，使DNA不断位于变性、复性和合成的循环中，达到扩增DNA的目的。何为Pcr技术？Pcr:Polymerasechainreaction就是反复进行包括热变性——退火——引物延伸三步骤的循环过程。1.热变性：基因组DNA在95度下加热5分，双螺旋结构被热变性解链为两股单链。2.退火：将反应混合物降温至55摄氏度，引物与上述单链DNA上互补的序列杂交在一起，即
8、退火，形成模板——引物复合物。3.引物延伸：迅速加入TaqDNA聚合酶，混匀。置反应混合物于70摄氏度，一分钟，在DNA聚合酶作用下，以dNTP为原料，从引物3’端开始，沿着5’—3’的方向，按照模板链的序列，合成一条新DNA链，其序列与模板序列互补。经上述变性---退火---引物延伸这一循环，双链DNA拷贝数增加一倍。进行n次循环，拷贝数将增加2的n次方倍，如进行25—30个循环，拷贝数即扩增上百万倍。ThePCRmethodcanbeusedforreduplic
