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1、PerkinElmer公司液相色谱现场培训教材PerkinElmer公司液相色谱现场培训教材FlexarLC-TotalChrom美国珀金埃尔默仪器（上海）有限公司1
2、页PerkinElmer公司液相色谱现场培训教材内容第一部分：液相色谱基本工作原理及基本知识第二部分：液相色谱仪标准化操作流程SOP第三部分：液相色谱软件（TotalChrom）操作第四部分：液相常见问题第一部分：液相色谱基本工作原理及基本知识液相色谱工作原理：是利用混合物中各组份在不同的两相中溶解,分配,吸附等作用性能的差异,当两相作相对运动时,使各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离，从而按一定次
3、序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。两相中有一相是固定的,叫作固定相(StationaryPhase),即色谱柱；有一相是流动的,称为流动相(MobilePhase),流动相又叫洗脱剂或溶剂。液相色谱仪实际照片如下：紫外检测器溶剂管理系统柱温箱自动进样器泵图1-1常见配置FlexarLC高效液相色谱仪外观2
4、页PerkinElmer公司液相色谱现场培训教材色谱柱(固定相)数据系统溶剂进样器(流动相)泵检测器废液图1-2高效液相色谱仪系统示意图图1-3样品组分分离示意图3
5、页PerkinElmer公司液相色谱现场培训教材1.液相色谱在各个
6、行业的应用在医药行业:药物中有效成分的含量、相关物质分析、药代分析、药物中间体的分析等；在环境保护工作中:可用来监测土壤,大气和水的质量；在食品工业中：可用于各种营养成分、非法添加剂、兽药、农药等的监控分析；在农业上可用来监测农作物中残留的农药；在石化上可用于各种添加剂、高聚物分子量等测定；生命科学上用于氨基酸、多肽、蛋白质及核酸等的分析；在公安用于鉴别药物中毒或毒品类型.2.液相色谱的各个组成部分由以下五大系统组成：高压色谱泵、进样器、色谱柱、柱温箱、检测记录系统。组分能否分开，关键在于色谱柱；色谱泵以恒定流速驱动流动相进入色谱柱从而保证了色谱分离的过程，所以色谱柱和色谱泵是液
7、相色谱仪的核心。4
8、页PerkinElmer公司液相色谱现场培训教材2.2部分：进样器分手动进样器和自动进样器两种图1-5Flexar自动进样器外观（左）及内部图图1-6六通阀工作示意图图1-6手动进样器六通阀横剖面图5
9、页PerkinElmer公司液相色谱现场培训教材手动进样器使用注意事项：手柄不能停留在Load和Inject中途！否则会暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀。在HPLC系统中使用平头注射器针头外侧紧贴进样器密封管内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气；也防止了针头刺坏密封组件及定子。过滤样品溶液，防止微粒阻塞进
10、样阀和减少对进样阀的磨损。每次结束后应冲洗进样器，通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗，在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗；进样前，用无纤维纸擦净注射器针头的外侧。2.3部分：色谱柱是液相色谱分离的核心，也是液相色谱系统中最常用的消耗品之一。在使用色谱柱之前，一定要先仔细阅读色谱柱的说明书(不同的色谱柱，使用要求差距很大)！不当的使用会严重缩短色谱柱的寿命！任何色谱柱都有液体流动方向，不能反用!最常用的BrownLeeC8、C18反相色谱柱通常使用要求：流动相的pH范围：2.5~7.5；使用温度：80℃以下；操作压力：小于4000psi;保存溶剂：100%甲醇。
11、表1-1色谱柱直径与最佳流速关系色谱柱直径最佳流速1.0mm50uL/min2.1mm200uL/min3.2mm500uL/min4.6mm1.0mL/min6
12、页PerkinElmer公司液相色谱现场培训教材2.4部分：检测系统经过分离的组分要选择合适的检测器，才能得到检测。液相常用检测器紫外检测器示差检测器荧光检测器电导检测器UVRIFLCD测量参数吸光度（AU）折光指数荧光强度电导率（RIU）（AU）（uS/cm）池体积/ul1～103～103～201～3类型选择性通用性选择性选择性线性范围105104103104最小检出浓度/(g/ml)10-1010-710-1110
13、-3最小检出量1ng1ug1pg1mg噪声10-410-710-310-3用于梯度洗脱可以不可以可以不可以对流量敏感性不敏感敏感不敏感敏感对温度敏感性低10-4C低2%/C还有比较新的蒸发光散射检测器ELSDPage383色谱常用定量方法3.1校正因子的概念校正因子是定量计算公式中的比例常数，其物理意义是单位面积所代表的被测组分的量。可用下式表示：mfAiiiMi–I组分的量；fi–I组分的校正因子；Ai–I组分的峰面积定量分析的依据是被测组分的量与响应信号成正比，但相同含量
