红豆生物碱对大鼠神经肌肉接头的突触后作用

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1、·2O7·红豆生物碱对大鼠神经肌肉接头的突触后作用高天明陈肇熙孙闻颖生理拳毂研室提要在不均匀章拉溢捌钓的鼻悻太曩瞩稗经腻腿标本上用截毒辣台药缸豆生物碱探讨了终扳暖的微管在神璺肌肉接头乙袭胆碱璺悼兴奋中的作用．缸豆生物碱(20I‘血ol,rE，1omen)使有神经交胃的膈肌终扳区乙酰胆碱电位幅廑TnT3O~：但不影响其时器和膜电位．结果表明谈药对神经肌肉接头有突触后抑制作用．其作用机箭可氇量过影晌霰瞥而煮使缚板鹿厦盘性下降．关键蜀缸豆生物碱t神经肌肉接六，舷管：乙酰咀碱受悻已有的实验资料证实，细胞内的微管对维目立体显微镜监视下，用微操纵器插入终板区持乌贼的巨大轴突

2、‘，培养的神经细胞’、单个肌细胞膜内，当记录到标准的小终板电位心肌细胞及肾上腺嗜铬细胞等细胞膜的和终板电位15rain后，且膜电位持续稳定。受体、离子通遭的正常功能具有重要的作用．将ACk电极夹在另一微操纵器上将尖端近年来形态学和细胞免疫化学已证实，神经浸入营养液中测量其电阻(一般为50一肌肉接头终板膜下的微管与终板膜的乙酰胆碱：00MQ)。ACh电极用银丝通过探头与MED-受体蛋白相连。我们曾观察到微管解聚药秋l型双路微电泳仪相连，电泳仪有两种电流输水仙素可使太鼠神经肌肉接头终板膜的反应性出。当需要电泳时，即可输出正向电泳电流，下降提示终板膜下的微管可能参与神

3、经肌将带正电荷的ACh分子泳出电极尖端。另一为肉接头乙酰胆碱受体的反应过程．红豆生物碱持续的负性滞留电流3—7nA，以防止在不是一种能够促进微管聚台的药物。本实验试电泳时ACh的持续外漏。移动ACh电极，在显图以该药为探针进一步探讨终板膜的微管在神微镜下尽可能靠近记录电极。当位置台适时，经肌肉接头乙酰胆碱受体反应过程中的作用。用一电刺激器经隔离器输出1ov触发方波触发微电泳仪，波宽lms，电流50hA此时可引材料和方法起一个慢的去极化电位，即乙酰胆碱电位(8c—etylcholinepotential，AChP)。判断ACh电Wistar大鼠(180-220g)

4、雌雄兼用．取左极是否已接近记录电极所在的终板区有三项指侧膈神经膈肌标本置浴槽内．槽内含20ml台氏标：(1)关闭滞留电流，由于ACh的持续微液(mmol／L{Na149．8．K5．0，Ca”2．0．量外溢可见膜电位有数毫伏的去极化：(2)开Mg1．OC1—147．8，HtPOI1．0，HCO；17．0，启滞留电流．上述去极化作用消失；(3)给脉Glucose11．0)，pH7．2—7．4．通以5呖COt冲正电流可见一幅度较大、上升相陡的AChP。和95呖Oz混合气，温度31±l℃．记录玻璃在ACh电极接近记录电极的过程中除注微电极充灌3mol／LKC1，10-2

5、0MQ。信号经意水平位移外，还要注意在不同深度寻找台适DWF一2型微电极放大器在VC一10示波器上显位置。当ACh电极插入记录电极所在的细胞内，示并照相，膜电位由微电极放大器上数字表显给予电泳脉冲时，可见一个与脉冲宽度一致的示，实验所用肌纤维膜电位均太于一65mV。电紧张电位，如不在同一细胞内则出现微分标本采用不均匀牵拉制动。。微电泳电极充以波．在寻找过程中，如出现电紧张电位，只3mol／LACh’C1．实验时，先将记录电极在双需将ACh电极上提，使其剐刚在肌细胞膜外，·208·就可记录到理想的AChP。电泳诱发的AChP尽用新鲜台氏液冲洗标本，30min后未见

6、AChP幅量使之潜伏期小时程短及幅度高。在实验全度有恢复。由于红豆生物碱溶于DMSO中，而过程中，严格保持ACh电极与记录电极的位置DMSO在较高浓度时对神经肌肉接头传递有影固定。响⋯，所以，在本实验中又设置了6例同红豆实验所用药品：红豆生物碱(taxol，美国生物碱组浓度一致的DMSO对照组。从表2可国家肿瘤研究所M·Suffness博士馈赠)先溶于知0．2DMSO(v／v)在1Omin内对AChP的二甲基亚砜(DMSO，Sigma产品)中，试剂在该储存液中浓度为lOmol／L，实验时台氏液稀释至51020gmmol／L作为最终浓度。此时，DMSO在浴槽内的最

7、高浓度为0．2(v／V)。氯化乙酰胆碱为Sigma产品。文中所用11均代表肌纤维数，每条肌肉标本仅用其中一条肌纤维。全都数据用均数±标Effectoftaxolonacety1cholinepotential准差表示。以自身对照t检验做统计学处理。Record(a)and(b)weyeobtainedbef0仲andafterapplicationoftaxol(20~tmol／LIOmi4respectively．Bothwerefromthe结果sameeⅡdDlateandwiththepipettesinapproximatelythesameposit

8、ion．Intensit