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1、丛枝菌根研究方法—、检测孑包子含量的方法A湿筛倾注法1.称収一定重量的土壤样品（最好是収口15cm表层植物根系附近的土壤），放在容器内用水浸泡20-30min,使土壤松散。如果土壤粘性很大，也口J加入各种土壤分散剂。2.选用一套洁净的具有孔径为0.5-0.034mm的土壤筛，依次重叠起来。最底层川一物体垫着（如培养皿、木块等物），使筛而稍微倾斜。3.用玻璃棒搅动浸泡的水溶液，停置儿秒钟后，使大的石砾和杂物沉淀下去，即将悬浮的土壤溶液慢慢地倒在最上一层孔径最人的七壤筛上。倾倒时，最好集屮倒在筛面的一个点上,不要使整个筛面都沾有土壤溶液。4.川清水依次轻轻冲洗停留在筛面上的筛出物，以免在
2、上层粗筛面的剩留物中夹藏有VA菌根真菌抱了。5.用洗瓶将停留在筛面上的筛出物轻轻冲洗到一个清洁的培养皿里面，再将滤液通过细筛并用水冲洗。在冲下来的筛出物中，除有许多细的沙砾和杂质外，就含有VA菌根真菌的不同直径的砲子。6.将含有筛出物的培养1111放在双H实体解剖显微镜下观察。B蔗糖离心法1.称取10g菌剂，置入大烧杯中加500ml水，搅拌，静置10s。2.先后过80冃分样筛、400冃分样筛，将400冃筛了上的残余物用药匙转入50ml离心铮中,后用清水冲洗筛子,将残余物全部转入离心管中,配平,3000转/min离心10min。（注分样筛最好总径为12cm左右，便于下而放置烧杯过筛）3
3、.去掉上清液，在离心管中加入预先配制好的质量分数为50%的蔗糖溶液，玻璃棒搅匀,配平，3000转/min离心10min（注意离心前离心管壁上不能有残余物）。4.将400目筛子呈-•斜血放置，离心后的蔗糖溶液过筛子的下侧，用水将筛子上的残留物轻轻洗入划线培养UlLipo（注意水不能加太多以防影响检测，培养111L划线便于统计）。5.解剖镜镜检统计培养皿屮的抱了数目，计算出菌剂屮的抱了含罐。注：溶于蔗糖溶液中的砲了仍可进行接种。A.GerdemannJW,NicolsonTH,1963.Sporesofmycorrhizalendogonespeciesextractedfromsoil
4、bywetsievinganddecanting.Transact!onsoftheBritishMycologicalSociety,46:235・244B.刘润进,李晓林.2000.丛枝菌根及其应用.北京：科学出版社:190-194二、检测菌根侵染率的方法（曲利苯蓝染色改良法）PhillipsJM,HaymanDS,1970.Improvedproceduresforclearingandstainingparasiticandvesicular-arbuscularmycorrhizalfungiforrapidassessmentofinfection.Transaction
5、softheBritishMycologicalSociety,55:158^161挑根一碱液软化一酸化一染色一脱色一制片、镜检1•将洗净的粗细合适的根系剪成1cm左右的根段至于三角瓶中。2.加入10%KOH在90°C的水浴锅中染色45^60min（去除细胞质，便于染色。一般幼根需要时间较短约0.5h,老根需要时间长约lh,以根系相对透明为标准）。2.弃去碱液，用清水洗3~5次(晾至室温后再冲洗)，加入2%盐酸室温下酸化5min03.加入0.05%曲利苯蓝于90°C水浴锅中染色30mino4.去除曲利苯蓝后，弃去溶液后用口来水冲洗，加入乳酸LT油溶液(1:1:1)室温卜•脱色24h,
6、(晾至室温示再冲洗，也可宜接脱色)。5.用蹑子夹取15条排列在载玻片上，每个样30条2个片，显微镜镜检(10x10)o说明：常规制片用水即可，或封固剂(聚乙烯醇1.66g,甘油1ml,乳酸20ml,蒸馆水10ml)制片片子可以保存较长时间，但容易产生气泡,经脱色后的植物根系可以在W油中保存数月。三、统计方法EstimationofmycorrhizalcolonizationaccordingtoTrouvelotetdl丛枝菌根真菌侵染性的评估方法(Trourelot等，1986)•TrouvelotA,KoughJL&Gianinazzi-PearsonV(1986)Mesure
7、dutauxdemycorhizationVAd'unsystemeradiculaire.Recherchedemethodesd'estimationayantunesignificationfonctionnelle.In:PhysiologicalandGeneticalAspectsofMycorrhizae,V.Gianinazzi-PearsonandS.Gianinazzi(eds.).INRAPress,Paris,pp.217-221.
