大蒜根尖诱导微核实验

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1、一、实验目的1.了解细胞微核形成的机理及其形态特点。2.学习植物根尖细胞的微核检测技术。二、实验原理微核(micronuclei)简称MCN,是真核类生物细胞屮的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生的。在细胞间期，微核呈圆形或椭圆形,游离于主核之外，大小应在主核1/3以下。微核的折光率及细胞化学反应性质和主核一样，也具合成DNA的能力。微核形成:有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断片不能向两极移动，游离于细胞质屮，在间期细胞核形成时，在核产生一到几个很小的圆形结构一微核，直径大约是细胞直径的1/20〜1/5。微核率的大小是和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关，因

2、此，微核是常用的遗传毒理学指标之一，指示染色体或纺锤体的损伤。微核测试已用于辐射损伤、辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及癌症前期诊断等各方面。三、实验用品实验器具：显微镜、解剖针、盖玻片、载玻片、培养皿实验试剂：改良苯酚品红染液、盐酸、叠氮化钠、水、洗洁精、土豆粉汤、冰红茶、尿实验材料：大蒜根尖四、实验步骤1・将大蒜去皮，在培养板上每个孔中放入2~3瓣，25°C培养48h。2•在培养板1号孔中加入冰红茶，2号孔屮加入土豆粉汤，三号孔屮加入水，4号孔中加入洗洁精，5号孔中加入尿，6号孔中加入叠氮化钠，25°C继续培养24ho3.剪下各孔内约lcm长的大蒜根，置

3、于离心管中加入固定液，固定24h。4.弃去管内固定液，加入卡纳氏固定液保存已固定的大蒜根。5•取出固定好的大蒜根,切取l~2mm根尖,用1mol/LUCl解离10mino6•吸干解离液，用蒸馅水清洗2飞次。7.吸干蒸憾水，用苯酚品红染色15mino&压片，镜检。注意事项：1•诱变前培养的大蒜不要让根长得太长。以lcm左右进行诱变最为适宜。2•固定时，要保证固定液可以充分浸润每条根。3.染色时最好轻轻将根尖压开一点，有利于中间的细胞着色。4.压片时要尽量是细胞分散成单层，但也不可分散太过，不利于找到分生区和伸长区进行对比观察五.实验结果冰红茶诱变结果土豆粉汤诱变结果尿液诱变

4、结果叠氮化钠诱变结果结果分析镜检染色较理想，压片不够彻底，有两层的情况，冰红茶，土豆粉汤都没有出现微核,洗洁精诱变可能由于表面活性剂是细胞核膜分解破裂，导致细胞核岀现方形形状。叠氮化钠结果预期，尿的诱变结果出人意料，比叠氮化钠的诱变效果更加强烈，细胞中能观察到很多细碎的微核。4叠氮化钠可能失效，也有可能是细胞处于不同的发育阶段，对突变的修复能力不同，対诱变剂的敏感程度不同