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时间:2019-08-30
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1、在基于生物技术的产晶屮寻找生物:处理过的小麦蛋白的电泳鉴定摘要:基于生物技术生产的产品或绿色产品的生物成分的检验可以鉴别出真正的产品,曝光出伪造品,支持或者反驳筒家所声称的产品内容,确保消费者的信任。当生物成分中包含蛋白质时,基础的氮元素分析刈于产品检测是不足够的因为非蛋白但氮含量丰富的成分也可能存在然而,蛋白质可以被提取出來,用电泳的方法分离,并用紫外可见光谱吸附、蛋白染色或者免疫印迹法检测。我们利用毛细管区带电泳(CZE)分离溶解在70%乙醇水溶液屮的麦醇溶蛋白中的蛋白片段,并且利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离溶解在含有十二
2、烷基硫酸钠(SDS)和还原剂二硫苏糖醇(DTT)的水溶液中的麦醇溶蛋白和麦谷蛋白混合蛋白片段。我们试着证明这些小麦谷蛋白存在于小麦制的面包,小麦的谷物,小麦制成的啤酒以及一种附件,这种附件是被认为包含小麦谷蛋白的一种古老的汽车点火线圈。把从商业化的小麦、谷物和黄豆粉作为标准,把从加热变性的小麦屮的蛋口作为过程的参照。这种方法能够成功鉴别出这些产品川的小麦蛋白,尤其是在操作过程的温度不超过120摄氏度时。超过这个温度,用CZE法分析的蛋白分析信号几乎完全衰弱,但类似于小麦蛋白的部分仍可用一维或二维PAGE验证出。利用特界性谷蛋白抗体反应
3、的免疫印迹法被证实可以用于谷物蛋白成分的鉴定,尤其是当蛋白部分被热修饰、特异性蛋白吸附或者蛋白消化剂大幅度改变时。此外为了检测小麦蛋白的存在,将这些方法互补应用能够显示出用在特定产殆的屮是完整的谷蛋白或者仅仅是乙醇溶解了的片段,并且能够揭示热引起的变性水平。关键词:基于生物技术产品;小麦;蛋白质;麦醇溶蛋白;麦谷蛋白;变性作用;毛细管区带电泳介绍:基于生物技术的产品是全部或部分来自于农作物成分如收获和处理过的残留物的最低限度的精制,植物体的适当精制,和/或淀粉、蛋白或其他植物化学成分的高度精制。不幸的是,这些生物产品的生物组分的鉴别可
4、能不是显而易见的。一些不道徳的生产者会造假和发表欺骗性的声明或者把石油中含碳化合物或传统的碳水化合物组分当作生物含碳组分,从而可能从这种不明确的差异中获取收益。因此,开发一种公认的方法用于基于生物技术的产品检测是消费者和有道德的生产者所感兴趣的,通过这种方法可以鉴别组成,用来区分真正的产品和伪造品,支持有智力成果的声明,支持或反驳产品川生产者通过标签或广告所宣称的成分,并且保证产品对消费者没有风险。这些产品检测方法同样为标明生物产品成分和存在生物技术产品的正确采购提供了很大的支持,在这些采购项目中,没有更明确信息,而仅仅是有所需的生物
5、制品或“新”的碳含量。生物技术产品屮的成分可能包括谷蛋白如玉米醇溶蛋白,小麦屮的谷蛋白和黄豆屮的蛋白,或者是一些含于碾碎的谷物和/或谷物蒸镭的蛋白质。小麦醇溶蛋白常被用于粘着剂、膜制剂、纤维、涂层、聚合物/树脂、墨水、洗涤剂、化妆品、护发产品、橡胶产品、牛奶的替代品和功能性食品。在食品和食品成份中,蛋白含量是很重要的,而且常规的分析方法是分析样品燃烧产生气体中的基础氮的含量。对于蛋白质分析中一般假定蛋白质是唯一含氮的组分。蛋白质中氮的质量一般在5.7至6.2,数值大小取决于基质成分。这种方法并没有检测出蛋白质的来源,并且当非蛋白组但氮
6、含量丰富的化合物,如三聚氤胺或三聚氤胺树脂,存在吋,基于燃烧的蛋白质测定将会虚高。明确的蛋白质分析方法已经建立,这些方法是结合溶剂性质不可逆的除去基质屮的蛋白组分利用色谱法或电泳的方法鉴别。这些方法已经被用作优化自然存在的蛋白质和检测鉴别这些蛋白质。由这些方法,一些品种被鉴别出,蛋白的组成也与原材料的功能、性质以及原产地的环境相联系。然而,处理过的蛋白分析时,在蛋白聚合物的物理和热的变性、蛋白和产品组成之I'可的不可逆的联系上还存在问题。在目前的研究中,如果一种谷物來源的蛋白质存在于基于生物技术的产品,我们试着寻找估计它的植物来源和溶
7、解度特性,并且试图估计在生产和/或使用过程屮它的热变性水平。我们通过应用毛细管区带电泳(CAE)和/或聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的方法研究可溶性蛋白。对于(CZE),它是在电荷和分子大小的基础上分辨蛋白,我们使用的是70%乙醇水溶液这样的低水平溶剂系统,这种系统能溶解麦醇溶蛋白和代谢的蛋白。对于PAGE,它是在分子量的基础上分辨蛋白,我们使用的是稳定的活性的溶剂系统,这个系统包含水溶的洗涤剂和一种起还原剂作用的化学物质,同样用来溶解麦醇溶蛋白和大量的麦谷蛋白。免疫印迹法的溶解峰用作特殊小麦蛋白的检测。测试用的基质是谷物或胚芽、小麦
8、粉、和干的小麦粉,这种干的小麦粉是暴露在对流干燥条件下,然后被用來分析产品组成,为后面的解释和比较做准备。我们测试了处理过的产品,这种产品中含有烘烤过的面包,一种煮过的并且干了的絮状谷物和一种小麦酿的啤酒这三种的两种。我
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