黄芪多糖改善老年大鼠学习记忆水平和其机制探究

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1、黄英多糖改善老年大鼠学习记忆水平和其机制探究［摘要］该研究通过观察黄茂多糖对老年大鼠学习记忆的影响，试探究其改善学习记忆能力的机制。实验以自然衰老雌性SD大鼠为动物模型，随机分为老年对照组、老年黄英多糖低、高剂量组（50,150mg-kg-1）和老年脑复康组（阳性对照，560mg-kg-1）,各组大鼠连续灌胃给药60d,另设青年对照组。采用旷场和Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力，蛋白免疫印迹法观察海马组织相关神经可塑性蛋白N-甲基-D-天门冬氨酸受体（NMDA受体）、钙/钙调蛋白依赖的蛋白激酶II（Ca

2、MKII）、蛋白激酶A（PKA）、cAMP反应元件结合蛋白（CREB）的磷酸化水平及脑源性神经营养调控因子（BDNF）的蛋白表达水平。研究发现与青年对照组比较，老年大鼠学习和记忆能力均显著下降（P2.4Morris水迷宫测试Morris水迷宫是直径120cm,水深50cm的圆形铁皮水池，水温控制在（24±1）工左右。池壁上有东、南、西、北4个入水点，其南北、东西的连线将水池划分为4个象限，分别称第1象限（SE）、第2象限（NE）、第3象限（NW）、第4象限（SW）,在第4象限正中离池壁24cm处放与水池背景同色

3、的平台，平台低于水面3cm。训练前1d将大鼠放入无站台的池中自由游泳，以适应环境和剔除漂浮且停留的大鼠。①定位航行实验测试：将大鼠面向池壁放入水中，从入水到找到隐蔽平台的时间记为潜伏期，若找不到平台则引导大鼠至平台停留数秒并记潜伏期为60s,每天分别从4个象限将大鼠放入水中训练并记录，历时5d。每天训练取当天平均潜伏期作为成绩，游泳的轨迹为总路程，取平均值作为成绩。②空间探索实验：第6天游泳测试撤去平台，记录大鼠在60s内穿越原平台位置的次数，以及在原平台所在象限的停留时间，检测大鼠对原平台的空间记忆情况。2.

4、5神经可塑性相关蛋白测定行为学实验结束后，立即断头，在冰上取海马组织，置-80°C保存备用。大鼠海马组织总蛋白提取按总蛋白提取试剂盒说明书操作，并用考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白浓度。取总蛋白(50ug)在SDS-PAGE凝胶上电泳分离2h,将凝胶湿转至PVDF膜。取出PVDF膜，浸于封闭液中室温轻摇封闭1h,用TBST缓冲液漂洗干净，浸入TBST稀释的一抗，室温下孵育1〜2h后，用TBST在室温下脱色摇床上洗2次，每次10min；再用TBS洗1次，10min。同上方法准备二抗稀释液并与膜接触，室温

5、下孵育1〜2h后，用TBST在室温下脱色摇床上洗2次，每次10min；再用TBS洗1次，10min。之后用ECL检测试剂盒显色，曝光、显影和定影，将胶片进行扫描或拍照，用凝胶图象处理系统分析目标带的相对分子质量和净吸光度值。2.6统计学分析用SPSS16.0软件对数据进行统计，结果以土s表示。实验结果先用单因素方差分析（AN0VA）,差异显著性再用Dennett'st检验进行组间统计分析。3结果3.1黄茂多糖对老年大鼠旷场实验的影响与青年大鼠相比，老年大鼠组运动总距离显著降低（P海马是哺乳动物空间学习、记忆形成

6、的重要结构功能区，也是神经可塑性改变的主要脑区[12]o在衰老过程中海马神经元的易损性是学习记忆退化的重要原因，成年人的海马神经发生随着年龄增长而迅速下降[13]o本实验选择的蛋白与神经可塑性密切相关。实验结果表明，老年大鼠p-NMDARl,p-CAMKII,p-KAC,p-CREB以及BNDF等蛋白相对表达较青年组显著下降。这些神经可塑性相关蛋白水平的下降，可能与记忆相关的任务密切相关。结果提示海马相应神经可塑性蛋白水平的下降影响其学习记忆功能，推测这可能是导致增龄性学习记忆减退的重要原因之一。经黄英多糖干预

7、后，这些神经可塑性蛋白的表达水平显著上升。目前临床上缺乏有效的抗衰老的药物，现有药物多只能对症治疗。中医药治疗的优势之一在于全面动员自身的调理功能，偏重于促进神经元自身的结构和功能变化。中药在缓解衰老及衰老相关疾病的防治方面有着丰富的理论和实践经验。目前中药单体及有效成分缓解衰老的研究进展较快[14-17],其中研究较多的有人参皂昔、灵芝多糖等[18-20],这些实验为寻找抗衰老药物提供了很好的思路和方法。本研究通过研究黄英多糖对神经可塑性蛋白的影响，探讨了黄英多糖对老年大鼠的学习记忆的保护作用。上调神经可塑性

8、相关蛋白水平可能是黄英多糖改善老年大鼠学习记忆能力的主要机制，其具体的信号转导通路及作用点仍需进一步的研究。[参考文献][1]TohdaC,MatsumotoN,ZouK,etal.AB(25-35)-inducedmemoryimpairment,axonalatrophy,andsynapticlossareamelioratedbyMI,ametaboliteofprotopan