《高三生物复习资料》选修一

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1、生物选修一生物技术与实践（部分专题）专题一大肠杆菌的培养与分离、分离以尿素为氮源的微生物1•培养基的分类：•培养基按照物理性质nJ分为液体培养基、半固体培养基和固体培养基。液体培养基应用于扩大培养和工业生产,固体培养基应用于微生物的分离、鉴定、计数（菌落数），半固体培养基则常用于观察微牛物的运动及菌种保藏等。•按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不盂要的微生物生长，促进所盂要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基小加入某种指示剂或化学药品配制而成的

2、，用以鉴别不同类别的微生物。2•培养基的化学成分:水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。•碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO?、NaHCOs等无机碳源；糖类、石汕、花生粉饼等有机碳源。异养微牛物只能利用有机碳源。3•培养基还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求：“细菌"荤”,细菌培养基常川蛋白豚和酵母提取物配制，还需加入一定量氯化钠，培养基dH调至中性偏碱；“霉菌喜索”,每菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁，培养基的DH调至屮性偏酸。4•无菌技术：消毒、灭菌项目消毒灭菌条件较为温和的理化方法强烈的理

3、化方法结果杀死部分微生物，不杀死芽他和抱子杀死所有微生物，包括芽他和抱了适用实验操作的空间、操作者的衣着和双手微生物培养器皿、接种用具（接种环、接种针）、培养基、无菌水、试管口、空气方法煮沸、巴氏消毒（80°C15min）、酒精、氯气等化学药剂灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌特别说明:若培养基中有不能加热灭菌的化合物如靈,则要用&玻璃砂漏斗过滤培养液,但漏斗使用前须121弋高压蒸汽灭菌①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②玻璃器IIIL、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所

4、用器械是高压蒸汽灭菌锅o④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。5•制作LB固体培养基（1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。（2）倒平板操作的步骤：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌而上，右手无名指和小指夹持三角瓶封口膜,其他三个手指拿装冇培养基（待冷却到60°C左右）的三角瓶。②将三角瓶口迅速通过火焰。③用左手的拇指和食指将培养皿打开一•条稍大于瓶口的缝隙，右手将三角瓶中的培养基（约10〜12mL）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，置于水平位置，轻晃。①等待平板冷却凝固，大约需5〜lOmino然后，

5、将培养皿倒置。6•大肠杆菌的分离（纯化）•常用方法：划线分离法和涂布分离法。口的都是：使聚集在一起的微生物分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落,以便于纯化菌种•划线分离法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，町以分离到由一个细胞繁殖而來的肉眼町见的子细胞群体，这就是菌落。・稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。分为系列稀释操作和涂布平板操作两步。・划线分离法操作步骤：①将接种坏放在火焰

6、上灼烧,直到接种坏烧红。②在火焰旁冷却接种坏,并打开棉塞。③将试管口通过火焰。④将己冷却的接种环伸入菌液中蘸収一环菌液。⑤将试管通过火焰，并寒上棉塞。⑥左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾冇菌种的接种环迅速仲入平板内，划三至五条平行线，盖上1111盖。注意不要划破培养血。⑦灼烧接种环，待其冷却后，从第•区域划线的末端开始往笫二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连，不能反复蘸取。⑧将培养血倒置放入培养箱中培养。・划线分离法操作的问题讨论a.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种

7、环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。b.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高・杀死菌种。c.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划纟戋

8、的末端幵始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。・涂布分离法操作的步骤：①将涂布器（玻璃刮刀）浸在盛有酒精的烧杯屮。②取少量菌液