基因工程原理习题（可编辑）

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1、基因工程原理习题1假如从一个原核生物中cloning某基因l-2kb请谈谈它的基木步骤①限制性内切酶切割外源DNA和载体②将外源DNA片段与载体连接③转化④筛选2什么叫基因工程GeneEngineering试从理论和技术两个方而谈谈GeneEngineering诞生的基础基因工程在体外将核酸分子插入病毒质粒或其它载体分子构成遗传物质的新组合并使之参入到原来没有这类分子的宿主细胞内而能持续稳定地繁殖理论基础近几十年来由于受到分子牛物学分子遗传学发展的影响基因分子生物学的研究取得了前所未有的进步而这些

2、学科的综合成就乂为基因工程的诞生奠定了坚实的理论基础①在40年代确定了遗传信息的携带者即基因的分了载体是DNA而不是蛋白质从而明确了遗传的物质基础问题①在50年代揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理解决了慕因的自我复制和传递的问题②在50年代末期和60年代相继提出了〃屮心法则〃和操纵子学说并成功地破译了遗传密码从而阐明了遗传信息的流向和表达问题技术基础①60年代-70年代限制性核酸内切酶和DNA连接酶解决了对DNA分子进行体外的切割和连接②慕因克隆载体的出现③大肠杆菌转化体系的建立④6

3、0年代发展的琼脂糖凝胶电泳和Southern转移杂交技术对DNA片段的分离和检测十分有用3基因克隆基因操作基因重组基因工程的概念及其相互联系基因克隆Genecloning是指对基因进行分离和扩大繁殖等操作过程其R的在于获得大量的基因拷贝在技术上主要包括载体构建大肠杆菌遗传转化重组子筛选和扩犬繁殖等环节基因工程是通过基因操作将目的基因或DNA片段与合适的载体连接转入目标牛物细胞通过复制转录翻译外源口的基因以及蛋口质的活性表达使转基因生物获得新的遗传性状的操作慕因操作对慕因进行分离分析改造检测表达重组

4、和转移等操作的总称基因重组不同来源DNA分子通过共价连接磷酸二酯键而组合成新的DNA分子的过程它们的相互关系基因工稈是通过基因重组实现的但基因重组并不都是严格意义上的基因工程基因重组是基因操作范畴的概念包括实验研究和生物技术的基因重组事件而基因工程则专指为实践应用而进行的重组事件基因操作是基因工程的技术基础基因克隆很多时候并不涉及遗传的改良4为什么说基因工程是生物学和遗传学发展的必然产物生物学和遗传学发展到现在无非就是向两个方向发展宏观和微观的宏观发展无非就性状研究外观特征等而微观方面就是像小分子

5、方向基因蛋口等方面发展而研究和链接这两方面的桥梁就基因工程技术第二章分子克隆工具酶1限制性内切酶可划分为哪几个类型各自有何特点根据酶的结构作用的不同可将限制性内切酶分为三种类型II型限制性内切酶具有高度特异性的DNA裂解点而I型和III型兼有修饰甲基化作用和依赖于ATP的活性但不能在识别序列上直接裂解DNA故用途较少因此II型限制性内切酶是基因工程和基因诊断中重要的工具酶通常不特别说明的即为II型限制性内切酶2哪些酶可用于DNA片段的末端标记KlenowDNA聚合酶和T4或T7DNA聚合酶在对DM

6、A片段进行末端补平反应或末端的置换反应时可引入标记的核昔酸3DNA聚合酶有哪些类型各有什么活性①EcoliDNApolI5-3DNA聚合酶活性5-3DNA外切酶活性3-5DNA外切酶活性心相印图文工作室整理luqiu91024②EcoliDNApolI大片段Klcnow酶5’-*3’DNA聚合酶活性3,-5’DNA外切酶活性5-3r)NA外切酶活性③T4噬菌体DNApol5‘一3’DNA聚合酶活性与Klenow酶相似3，->5,外切酶活性Klenow酶X200在无dNTP时只有该活性常用于填平ds

7、DNA的3’缩进末端及水解dsDNA的3’突岀末④T7噬菌体DNApol及测序酶夕->3ZD7A聚合酶活性3’一5’外切酶活性Klenow酶X1000⑤耐热DNA聚合酶Taq酶在高温下仍具活性的DNA聚合酶5,7DNA聚合酶活性5-3DNA外切酶活性⑥反转录酶依赖于RNA的DNApol5->3DNA聚合酶活性需Mg2RNasell活性5->3及3f5RNA外切核酸酶活性①末端转移酶terminaltransferaseDNA修饰酶不依赖于模板的DNA聚合酶在二价阳离子存在下催化dNTP加在DNA分

8、子的3'-0H端4在分子克隆屮所用的酶主要作用于哪些底物限制性内切酶乂称内切限制酶或限制酶作用底物识别和切割双链DNA分子中某种特定核井酸序列连接酶作用底物将双螺旋DNA分了的某一条链上两个相邻核昔酸之间失去一个磷酸二酯键所出现的单链缺口封闭起来修饰酶作用底物能催化稀有碱基参入RNA或DNA或对原有碱基进行修饰以防止限制性内切酶的破坏第三章分子克隆1何为载体一个理想的载体应具备那些特点将外源DNA或基因携带入宿主细胞hostcell的工具称为载体载体具备的特点①在宿主细胞内必须能够