肿瘤学研究常用实验技术及方法

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1、肿瘤学研究常用实验技术及方法复习题1.表观遗传的科学内涵三个特点？a)基因功能完全、稳定地丧失，有遗传性；b)细胞外环境长期作用的结果，有可逆性；c)分析方法灵敏，可检出少数细胞的变化2.变性高效液相色谱(DHPLC)技术在肿瘤研究中的应用DHPLC的主要应用？SeparationofDNA,MSI,LOH,STRs,Q-PCR,detectionofmutation,SNPs,oligos,RNA.3.蛋白质分离纯化及鉴定i.分离纯化蛋白质的方法有哪些？盐析，透析，离心，凝胶过滤（分子筛）层析，离子交换层析，亲和层析，高效液相层析。ii.等电聚焦电泳（IEF）与SDS

2、-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）有何不同？等电聚焦电泳：利用蛋白质分子等电点的不同，在一个稳定的、连续的、线性的pH梯度中进行蛋白质的分离和分析。nSDS-PAGE:蛋白质分子一经结合了一定量的SDS阴离子，所带负电荷的量远远超过了它原有电荷量，从而消除了不同种类蛋白质间电荷的差异。在电泳过程中，迁移率仅取决于蛋白质-SDS复合物的大小，也可以说是取决于蛋白质分子量的大小，而与蛋白质原来所带电荷量无关iii.两种等电点相近的，分子量相差较大的蛋白质应该首选那种分离方法？SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳iv.蛋白质印迹（WesternBlotting）过程中应注意的事项

3、有哪些？1.丙烯酰胺有神经毒性，可经皮肤、呼吸道等吸收，故操作时一定要注意防护。2.制备聚丙烯酰胺凝胶时，小心防止凝胶渗漏。3.蛋白加样量要合适，加样量太小，条带不清晰，加样量太大，则泳道超载，条带过宽而重叠，甚至覆盖至相邻泳道。4.对多种蛋白质而言，电流大则电泳条带清晰，但电流过大，玻璃板会因受热而破裂，故适合的电流为玻璃板微热。5.胶转膜后应在膜上标记好正反面及电泳方向。6.电转移时应注意勿将滤膜和胶的位置放反，而且滤纸、滤膜和胶应等大，以免短路。4.组织培养/基因的克隆、转化与表达i.请列举至少3种流式细胞仪的用途?1.定量检测细胞膜、细胞质和细胞核中的各种细胞成

4、分2.研究细胞的各种功能状态(细胞增殖，细胞凋亡、细胞分化、酶活性、细胞膜通透性、氧化还原状态、吞噬性等)。3.定量检测血清中的各种可溶性生物分子成分临床中应用：1.白血病和淋巴瘤的免疫分型2.肿瘤的细胞周期和倍体分析3.细胞移植的交叉配型4.免疫状态监测5.干细胞分析6.治疗效果监测ii.影响细胞培养成功与否的因素有哪些？1.组织和细胞供体的种类及年龄2.培养条件：培养基血清（经验法、试验法）3.贴附底物：4.培养方法：消化方法iii.列举常见的细胞培养的污染1.微生物：真菌、细菌、支原体和病毒2.化学物：3.细胞iv.在基因克隆中常用的酶类都有哪些？各有什么作用？限

5、制型内切酶（RestrictionEnzymes）磷酸酶（phosphatase）激酶（Kinase）连接酶（Ligase）5.生物质谱简介生物质谱在蛋白组学中的应用？1.ProteinsMWmeasurements；2.ProteinIdentification；(ID)3.Peptideandproteinprofiling；4.ImagingMS；5.ProteinPTMs；5.ProteinQuantification6.《常用电泳技术基本原理及应用》课程复习题i.简述形成不连续PAGE电泳的样品浓缩效应的4个不连续性。1.凝胶的不连续性-浓缩胶4%大孔径，分离

6、胶-20%小孔径2.缓冲离子的不连续性-浓缩胶αCl->α蛋>αGly;mclαCl->m蛋α蛋>mGlyαGly；分离胶αCl->αGly>α蛋;mclαCl->mGlyαGly>m蛋α蛋3.PH的不连续性电极缓冲液PH8.3;浓缩胶PH6.7；分离胶PH8.94.电位梯度的不连续性浓缩胶-较高的电位梯度；分离胶-均一电位梯度ii.双向电泳的定义并简述以细胞为样本做双向电泳的实验步骤。定义：等电聚焦电泳和SDS-PAGE的组合，即先进行等电聚焦电泳（按照pI分离），然后再进行SDS-PAGE（按照分子大小），经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。实验步骤：1.样品

7、蛋白的制备(samplepreparation)；2.蛋白定量(determinationofconcentration)；3.等电聚焦(第一向)(first-dimensionisoelectricfocusing)；4.平衡(IPGstripequilibration)；5.SDS-PAGE(第二向)(second-dimensionSDS-PAGE)；6.染色(staining)；7.图像采集和分析(visualizationandevaluationofimages)；8.质谱鉴定蛋白(Massspectrometryofprot