常规pcr技术与单分子pcr技术

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1、医学信息2010年11月第23卷第11期MedicalInformation．Nov2010．Vo1．23．No．11粪便软化排出，或用肥皂水灌肠或肛门内使用开塞露促使排便。心表1本组患者死亡率及护理满意度评价统计动过缓病人避免排便时过度屏气，以免兴奋迷走神经加重心动过缓。生活不能自理的老年患者的饮食、大小便、洗漱等均由护士协助完成。嘱患者戒烟限酒，减少心血管病事件发生的诱因。并且要注意口腔黏膜及皮肤的变化，及时进行预防、护理。皮肤护理方面，应保持床铺干沽，平整、无皱折，受压处给予勤翻身、局部按摩等。对于手术病人还应注意禁食时间。

2、4讨论2．4病情观察护理心血管疾病常由某些因素诱发而加重，因此应加由于护理对象是老年心血管疾病的患者，心血管疾病属于危险强对患者的观察护理。首先应严密关注患者的体温、心率、血压、血病症，死亡率较高，这就要求护士要具备思维敏捷、知识丰富、语言恰糖等生命体征变化，根据患者的全身情况制订基础护理的方案。同当及技术娴熟等良好的素质和高尚的职业道德。从患者的角度出发，时，及时了解患者不适主诉，如胸闷、胸痛、气短，并观察其部位，性让其感受到家一样温馨的住院环境、医护人员的细心体贴，做好每一质及持续时间，及时通知医生并采取措施。其次，要认真观察

3、病情变位患者的心理护理、生活护理和疾病的观察护理。只有通过精心、耐化，掌握专科常用药的作用、注意事项。心血管疾病药物对老年患者心的护理，才能为患者减轻病痛，提高治愈率，同时可以缩短住院日，与中年患者在剂量上有很多不同，因此，应根据老年人的排泄能力减少并发症，促进患者早日康复。差，肾功能减退的特点，严格掌握剂量密切观察其精神状态、血压、参考文献：尿量及胃肠道反应，做好三查七对，加强巡视，输液时控制滴速，提[1】周丽霞等，对老年人心血管疾病的护理体会【JJ．中外健康文摘，2009，8高静脉穿刺成功率，保护好患者血管。(27)：185～

4、186．3结果[2]沈宏云，心血管疾病的个性化护理叫．医学信息，2010，23(2)：206-207．[3】王茵，心血管疾病患者的心理特点、生活质量及护理对策明．中国实用护理本组198例患者，经过治疗护理后，除2例由于抢救无效死亡杂志，2009，25(9)：85—86．外，其余患者的病情均恢复稳定出院，护理治疗的有效率为98．98％。编辑／雅兰本组患者死亡率及护理满意度评价统计如表1：常规PCR技术与单分子PCR技术刘连生(长江大学医学院，湖北荆州434023)摘要：常规PCR技术大都以大量DNA分子(一般为10个以上)为模板进行

5、DNA扩增。单分子PCR技术是以极少量DNA分子(1、5或1O个分子)为模板进行DNA扩增。在高保真度DNA聚合酶作用下，单分子PCR技术能扩增出高度一致的DNA；在低保真度DNA聚合酶作用下。单分子技术又能构建出大量突变基因的DNA文库。关键词：常规PCR；单分子PCR；DNA聚合酶PCR(polymerasechainreaction)的中文全称为聚合链反应。SM—PCR是基于常规PCR技术发展而来的，包括变性、退火、延PCR技术随着自身的发展及其与已有分子生物学技术的结合衍生伸3个基本环节，但在模板数量、引物设计、DNA聚合

6、酶选择以及反了多种技术，如逆转录PCR(reversetranscriptionPCR．PT—PCR)、原应条件上与常规PCR存在较大区别。为PCR(insituPCR)、实时PCR(insituPCR)等[1l。单分子PCR模板的准备：SM—PCR是在DNA模板稀释到极端条件下进行(singlemolecularPCR，SM—PCR)技术12l是最近发展出的新的PCR的扩增反应，模板的质量直接决定实验的成败与扩增效率。实验中，技术。该文将着重介绍常规PCR技术与单分子PCR技术要点、特点首先用限制性内切酶消化质粒DNA得到含有靶

7、DNA的片段，经常及其优点。规PCR扩增，PCR产物再经酚，氯仿抽提，酒精沉淀和HPLC等方式1常规PCR技术要点”纯化。纯化的DNA用含0．1％(V，w)的蓝色葡聚糖2000或1ng／LPCR反应体系的基本成分包括：模板DNA、特异性引物、耐热tRNA的．I’E溶液稀释到1个(或5个，或10个)分子／1的终浓度。DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)、dNTP以及含M的缓冲液。蓝色葡聚糖2000或1nLtRNA的作用是为了防止DNA吸附于管模板DNA的变性模板DNA经加热至94℃，使模板DNA双链壁上，以保证模板DNA的正常变性、

8、引物的退火以及链的延伸。完全变性或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，同时引物的设计：SM—PCR反应混合物中模板数极低，若引物之间引物自身以及引物之间的局部双链也得以打开。存在少量配对序列，循环扩增下极易形成二聚体。因此。在进行引物模