九种载体的多克隆位点及质粒图谱

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1、九种载体的多克隆位点及质粒图谱（pLLP-OmpA、pLLP-STII、pMBP-P、pMBP-C、pTrc-CKS、pET-GST、pET-Trx、pET-His、pET-DsbA）这九种载体的多克隆位点均为GGATCCGCAGAATTCAGCGCTAGCCAC（TAA）CATCATBamHIEcoRINheIHisHisHisCATCATCATTAAGCTTHisHisHisHindIII我们建议您扩增基因5¢端选BamHI或BglII，3¢端选NheI或XbaI或SpeI，同时3¢端不要带终止密码子，注意与GGATCC（GlySer）表达框架正确，载体用

2、NheI—BamHI双酶切。BamHI和BglII为同裂酶，NheI、XbaI和SpeI为同裂酶。如您目的基因无法满足上述要求，如同时含有BamHI和BglII，5¢端可选择EcoRI，但须注意与表达框架GAATTC（GluPhe）对齐。如您目的基因同时含有XbaI、NheI和SpeI，3¢端可选择EcoRI。如果您的目的基因已带有终止密码子，同样可以进行克隆表达，只是注意有些表达载体是在C端带6个His。PCR引物设计时BamHI和EcoRI位点的5¢端保护碱基有2至3个GC即可，而XbaI、NheI和SpeI位点5¢端保护碱基须在5个左右才容易被酶切割。（

3、一）pLLp-OmpASize:7.5Kb多克隆位点：PlpplacoperatorRBSCGAGGCGCAAAAAATGAAAAAGACAGCTATCGCGMetLysLysThrAlaIleAlaOmpAsignalATTGCAGTGGCACTGGCAGGTTTCGCTACCGTCGCTCAGGCTGGATCCGCAIleAlaValAlaLeuAlaGlyPheAlaThrValAlaGlnAlaBamHIGAATTCAGCGCTAGCCACCATCATCATCATCATTAAGCTTEcoRINheI6His-tagHindIIIBamHIEcoRIN

4、heI6His-stopHindIIIPlpplacoperatorRBS—ATG—OmpAsignal—MCS—基因克隆表达功能区序列如下，经DNA双向测序验证ctcactttatctaagatgaatccgatggaagcatcctgttttctctcaatttttttatctaaaacccagcgttcgatgcttctttgagcgaacgatcaaaaataagtgccttcccatcaaaaaaatattctcaacataaaaaactttgtgtaatacttgtaacgctacatggagattaactcaatctagctagagaggcttt

5、acactttatgcttccggctcgtataatgtgtggaattgtgagcggataacaatttcacacaggaaacagctatgaccatgattacggattcactggaactctagataacgaggcgcaaaaaatgaaaaagacagctatcgcgattgcagtggcactggcaggtttcgctaccgtcgctcaggctggatccgcagaattcagcgctagccaccatcatcatcatcattaagcttagatccggctgagcaacgacgtgaacgcaatgcgttccgacgttcaggct

6、gctaaagatgacgcagctcgtgctaaccagcgtctggacaacatggctactaaataccgcaagtaatagtacctgtgaagtgaaaaatggcgcacattgtgcgacattttttttgtctgccgtttaccgctactgcgtcacgcgtaacatattcccttgctctggttcaccattctgcgctgactctactgaaggcgcattgctggctgcgggagttgctccactgctcaccgaaaccggataccctgcccgacgatacaacgctttatcgacta载体其它部分序列

7、见GenebankLocusASAK3121(plasmidpIN-III-ompA1)（二）pLLp-STIISize:7.5kb多克隆住点：PlpplacoperatorRBSGAAGGAGATATACATATGAAAAAGAACATCGCATTCCTCMetLysLysAsnIleAlaPheLeuSTII　signalCTGGCATCTATGTTTGTTTTCTCTATCGCTACCAACGCTTACGCTGGATCCLeuAlaSerMetPheValPheSerIleAlaThrAsnAlaTyrAlaBammHIGCAGAATTCAGCGCTAG

8、CCACCATCATCATCATCAT