ABO血型正定型标准操作规程

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1、ABO血型正定型标准操作规程一．目的：规范ABO血型正反定型的操作。二．适用范围：适用于ABO血型正反定型。三．支持性文件：全国临床检验操作规程第二版。四．原理：根据红细胞上有或无A抗原或／和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型。可利用红细胞凝集试验，通过正反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知抗A和抗B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或／和B抗原；五．仪器：离心机。六．试剂：1．抗A、抗B分型血清；定期进行效价滴定,以保分型血清质量性能符合要求。抗A：1∶128，抗B：1∶128。七．样本要求：1．红细胞可用针刺手指采血，并直接用生理盐水稀释制成5%

2、红细胞悬液；也可静脉采血，用1∶9枸橼酸钠抗凝．。2．血清取静脉血将血液沿管壁慢慢注入干燥试管中，待自然凝固后用玻璃棒轻轻搅动血块，使之与试管壁分离。或置37℃水浴1小时，使血块收缩离心分离血清。八．操作步骤：1．取洁净小试管3支，分别标明抗Ａ．抗Ｂ和抗A＋B，用滴管分别加抗Ａ．抗B和抗A＋B分型血清各1滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5%红细胞悬液1滴，混合。2．另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞；用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5%试剂红细胞悬液1滴，混合。3．用离心机以1000r／min离心1分钟；或3400r/10秒

3、。4．将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。5．观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型；类B或cisAB的发现。6．凝集强度判断标准：4＋＝红细胞凝集成一大块，血清清晰透明3＋＝红细胞凝集成数小块，血清尚清被鉴定血的血型抗A（B型）抗B（A型）A型+—B型—+O型——AB型++九．注意事项1．观察结果时不可用力振摇；2．严格按规程操作，避免操作失误，以免重新试验浪费时间和试剂；3．试验结束后，试剂置2-6℃冰箱保存，以免试剂中的免疫球蛋白变质聚凝胺法交叉配血实

4、验操作规程1.  目的：检出和鉴定意外抗体。2.  原理：凝聚胺溶解后产生的阳离子中和红细胞表面的唾液酸使红细胞间距缩短，发生由IgG直接搭桥的可逆的非特异性凝集，当非特异性凝集回复时，只剩下由抗原抗体搭桥的特异性凝集。3.  适用范围：配血。4.  所需材料：聚凝胺试剂、、洁净试管、滴管、离心机5.  操作程序：5.1  以生理盐水洗涤受血者和献血者红细胞1—3次，配成3-5%的悬液。5.2  交叉配血试验：主侧：2滴患者血清加1滴供者3-5%的RBC悬液。次侧：2滴供者血清加1滴患者3-5%的RBC悬液。。5.3  每只试管加4滴低离子液，混合放置1分。5.4  分别

5、加2滴Polybrene应用液，混合放置15秒。5.5  离心3400转/分15秒，弃上清，控干。5.6  观察管底有无聚凝物，如果没有则需重做。5.7  每管各加2滴解聚液，轻轻混合10秒，观察结果并做记录。5.8  结果判定：10秒内若为Polybrene引起的聚合应该会散开，判为阴性。若为抗原抗体引起的凝聚则不会散开，判为阳性。6.  注意事项：6.1  可以用EDTA血浆代替血清6.2  加入解聚液后应该在3分钟之内观察结果6.3  解聚液不可多加，以免降低试验灵敏度