2019机能学创新性实验设计报告书

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1、机能学创新性实验设计报告书　　机能实验学实验设计报告　　实验名称：实验设计人：专业：年级班级：联系电话：指导教师：　　　　人指甲对慢性化脓性中耳炎的药用价值　　　　20XX年11月15日　　1　　　　实验内容：一、立题理论依据及研究现状。理论依据：根据《草医草药简便验方汇编》中所述，人指甲，冰片少许，共研细粉。用时先将耳道洁净，后吹药粉。可治慢性化脓性中耳炎。在某一偏方中也有说将人指甲烤干后磨粉，然后掺入一定比例的白矾。用时将耳道洁净，后吹药粉。从以上依据可知，人指甲对慢性化脓性中耳炎有一定的药用价值，但其科学性有待考察。研究现状：针对慢性化脓性中耳炎，王冰

2、和许珉在国际耳鼻咽喉头颈外科杂志中表示，慢性化脓性中耳炎与细菌生物膜密切相关。他们认为低毒力的细菌或病毒感染是分泌性中耳炎的重要致病因素，而细菌生物膜的形成和发展包括调节膜的形成、细菌可逆性附着、细菌繁殖、细菌播散5个过程，可通过屏障作用、生物膜特殊的微环境、耐药表型的表达对抗机体免疫、密度感应系统等多种方式导致抗生素耐药，从而导致慢性感染迁延不愈或反复性发作。通过对患者的分泌液进行培养，发现最主要的致病菌为金葡萄菌和铜绿假单胞菌。故针对慢性化脓性中耳炎的治疗方面提出假设：通过抑制细菌的黏附，破坏保护性基质、脂质体包裹抗生素穿透生物膜的目的，从而对慢性感染的

3、治疗提供新的突破。二、主要研究内容及实验过程。1、实验对象、性别、规格、数量健康豚鼠70只，雌雄不拘，体重250-300g。所选豚鼠均为耳廓反应灵敏，电耳镜检查可见鼓膜完整，光锥清晰，排除外耳道、鼓膜、中耳等感染。2、仪器与药品仪器：笼子、电耳镜、试管、注射器、生化培养箱、方形滤纸试剂：铜绿假单胞菌落、3%戊巴比妥钠溶液、生理盐水、人指甲粉末、白矾粉末、冰片粉末、氧氟沙星洗耳液3、实验步骤将豚鼠分为七组，分别进行编号放置于鼠笼中。制备豚鼠的慢性化脓性中耳炎模型。取真空保藏铜绿假单胞菌菌种活化24h后，取一个单菌落于盛5mlMH肉汤培养液的试管中，35℃静止培

4、养12h左　　2　　右，取3ml转入盛150mlMH肉汤培养液的锥形瓶中，35℃、120r/min振荡培养12h.制成菌悬液，并将此菌轻液作为母液。采用边配制边测定的方法，用MH肉汤培养液作对照溶液，用光程为1cm的立方石英比色杯校准其线，然后依次2倍稀释加母液的MH肉汤培养液，测定其OD值。“陈寅儿”经过实验，测算出波长在585mm时，铜绿假单胞菌菌液浓度与OD值之间关系的间归方程式为Y=+式中Y为OD值，X为菌液浓度，基本单位为108CFU/ml.本实验所需菌液浓度为/ml。当X等于1时，其菌液浓度为/ml,对应的OD值为我们计算最接近此OD值时母液的稀

5、释倍数，将母液用PBS稀释同样倍数并再稀释100倍，所得到的菌液浓度即为/ml,4℃冰箱保存备用。所有豚鼠腹腔注射3%的戊巴比妥钠溶液35-50mg/kg实施全身麻醉，用75%酒精6消毒双侧外耳道。用1ml无菌注射器抽取*10CFU/ml铜绿假单胞菌菌液，接5号半腰椎穿刺针，在光纤电耳镜的直视下，经鼓膜紧张部后下象限穿刺，向鼓室内注射，每侧各100μl菌液。向1组豚鼠耳中吹入人指甲粉末，2组豚鼠吹入白矾粉末，3组豚鼠吹入冰片粉末，4组豚鼠吹入人指甲和白矾的混合粉末，5组豚鼠吹入人指甲和冰片的混合粉末，6组豚鼠向耳中滴入氧氟沙星液，7组豚鼠不作处理。前6组豚鼠

6、均一日两次。具体如下表所示：试剂剂量组别第一组第二组第三组第四组第五组第六组第七组指甲白矾冰片指甲+白矾指甲+冰片氧氟沙星3mg　　3mg　　3mg　　3mg　　3mg　　3滴对7组豚鼠进行观察并记录数据。4、观察指标3　　鼓膜炎症状念评分标准如下表所示：0分:正常，无炎症表现1分:轻度充机，伴轻度内陷2分:中度充血，伴中度内陷或凸起，并有轻度中耳积液3分:重度充血和内陷，并有中到重度的中耳积液4分:鼓膜穿孔并流脓进行听阈测验，检验其传导性耳聋的严重程度。三、实验研究的技术路线制定课题　　指甲白矾冰片指甲+白矾指甲+冰片氧氟沙星液不作处理制作豚鼠慢性化脓性中

7、耳炎模型正式实验做预实验，检验可行性制定实验计划收集、查找资料　　分析结果4对豚鼠进行观察对各个豚鼠的恢复情况进行记录四、预期实验结果若4、5、6组豚鼠治愈所需的时间相同或比6组所需时间短若在成立的条件下，1、2、3组所需时间较长甚至与7组一般长短若1、2、3、4、5在6组豚鼠痊愈后仍未痊愈而与7组豚鼠所需时间相当甚至比7组豚鼠情况更严重若1、4、5、6所需时间相同或1、4、5所需时间少于6组，而2、3组所需时间较长但也能痊愈若2、3、4、5、6组所需时间相当或2、3、4、5组所需时间少于6组而1组所需时间与7组相当五、可行性分析实验所需仪器、试剂以及实验动

8、物不难获得。该动物模型已有前人使用过并成功使用。在正