GBT4789.29-2003 食品卫生微生物学检验 椰毒假单胞菌酵米面亚种检验.pdf

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1、GB/T4789.29-2003前言本标准对GB/T4789.29-1994《食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》进行修订。本标准与GB/T4789.29-1994相比主要修改如下:—按照GB/T1.1-200。对标准文本的格式和文字进行修改。—规范原标准中的“设备和材料”。本标准自实施之日起，GB/T4789.29-1994同时废止。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所。本标准主要起草人:刘秀梅、白竟玉、付萍、杨宝兰。本标准于1994年首

2、次发布，本次为第一次修订GB/T4789.29-2003食品卫生微生物学检验椰毒假单胞菌酵米面亚种检验范围本标准规定了椰毒假单胞菌酵米面亚种检验的基本要求、操作程序和结果判定。本标准适用于酵米面、变质鲜银耳及其他淀粉类发酵食品引起食物中毒的病因学诊断及椰毒假单胞菌酵米面亚种的常规检验及菌种鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新

3、版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GB/T11675银耳卫生标准3设备和仪器3.1冰箱:4℃一一200C。3.2恒温培养箱:26℃士1'C,36℃士1r-。3.3恒温水浴锅:46℃士I*C。3.4显微镜:lox-l00X。3.5离心机:4000r/mine3.6架盘药物天平:。g-500g，精度0.5g.3.7锥形瓶:100mL,500mL.3.8灭菌吸管:1mL(具0.01mL刻度),10mL(具0.1mL刻度)。3.9灭菌

4、平皿:直径90mm,120mm.3.10灭菌试管:16mmX160mm.3.11离心管:30mmX100mm,3.12小试管:10mmx100mm,3.13灭菌L形玻璃棒。3.14灭菌透明玻璃纸、滤纸。3.15灌胃器:1mLe3.16小白鼠:18g-20g.4培养基和试剂革兰氏染色液:按GB/T4789.28配制。4.2氧化酶试验:按GB/T4789.28执行。4.3马铃薯葡萄糖琼脂(PDA):按GB/T4789.28配制。4.4马铃薯葡萄糖半固体琼脂:按4.3PDA配方，琼脂量减至。.5g/100mLe4

5、.5马铃薯葡萄糖水(PD水):按4.3PDA配方，不加琼脂。GB/T4789.29-20034.6GVC增菌液(椰毒假单胞菌酵米面亚种增菌用>:在高压灭菌的PD水(4.5)中，以无菌手续加龙胆紫水溶液(最终浓度为1/1。万)氯霉素水溶液(最终浓度为20Wg/mL)混匀、分装后置4℃备用。4.7卵黄琼脂:按GB/T4789.28配制。4.8SS琼脂:按GB/T4789.28配制。4.9Hugh-Leifson培养基(O/F试验用):按GB/T4789.28配制。4.10蛋白陈水(靛基质试验用):按GB/T47

6、89.28配制。4.11缓冲葡萄糖蛋白陈水(MR和VP试验用):按GB/T4789.28配制。4.12西蒙氏柠檬酸盐培养基:按GB/T4789.28配制。4.13苯丙氨酸培养基:按GB/T4789.28配制。4.14糖发酵管:按GB/丁4789.28配制。4.15半固体琼脂:按GB/T4789.28配制。4.16抗O多价血清、型特异性因子血清()皿,o-iv,O-V,O-Vl,o-Vg型,o-珊型)。5检验程序椰毒假单胞菌酵米面亚种检验程序见图l,GB/T4789.29-20036操作步骤6.1增菌用无菌操

7、作取样品25g，加人盛有225mL增菌液的锥形瓶中(鲜银耳样品取1g，用剪刀剪碎，加人盛有20mL增菌液的锥形瓶中)36℃士1℃培养48he6.2分离、纯化培养取增菌液一接种环，划线接种PDA平板，36℃士1℃培养24h-48h。观察平板上生长菌落的形态，挑取可疑单个菌落，进行革兰氏染色及氧化酶试验。革兰氏染色阴性，氧化酶试验阴性的菌落再点种卵黄琼脂平板及SS琼脂平板,36℃士1℃分别培养48h和24ho椰毒假单胞菌醉米面亚种在不同分离平板上的菌落特征见表1,表1椰毒假单胞菌酵米面亚种在不同分离平板上的菌落

8、特征培养基菌落特征菌落1mm^2mm，灰白或乳白色，光滑、湿润、边缘整齐。培养48h后，中心有凸起，呈草帽PDA平板状，菌落周围有黄绿色素扩散到基质中菌落表面光滑、湿润,48h后，菌落周围形成乳白色混浊环，斜射日光下可见环的表面呈虹彩卵黄琼脂平板现象SS琼脂平板不生长从卵黄琼脂平板上挑取卵磷脂酶阳性，并带有虹彩环的单个菌落，接种PDA斜面，36℃士1℃培养24h，供下步试验用。6.3生化试验从纯培养的PDA斜面上