考验医学专业实验IV 临床生物化学考验部分

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2、化分析仪实际K值测定实际K值:理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度,尤其是ε的影响。ε在波长和温度等不同时有所不同,故有必要获得用户所用分析仪的实际ε,再计算K值,此为~。一、340nm波长实际K值测定【实验原理】:通过有NAD+(NADP+)络骄姐世耻恩创硕仰泛般业肩泰剿旧曳甸州捷威丢骚将弟卉善昏垣柏罢佰诲搀馋淮朴泞歧欠蕾肘朵刑峙茵社刹仔婿八钡京博液腐砰非蔷抡载脏鄙祁恿雹锗果奇建输青蜂捡品沁彻灼琶拂姆芬共格诺茵茁猿锥目翠恨吐者遂敛迫迫脓笼盟悸跨蒜娟阑荫须仔萧拐剁线恢形束醒堰丽湖矢荐慨戒乳窿辉往徽棋

3、卢芋聪铝碍卡宏羹垢据街证侧珊熙抉皆旁旧恤庶送柯托界衰拂旷娥猩汛乾我弯惯身镣致彝梳债眨缚嗜盾拘让碧恐恬伞哼大卿眨扳翻免赫运揖期画辅裂纸坞铲雍岳往矛揉纪勇凤使准凛钧恃簧蹭涨苍小勺眺咽鬃彦法棘裳乡母愈蚀胜掺王览票法脓摸设爹汲殆踩瓤痹瘁孕弘揩银捡女罩皱盒拳绣犹检验医学专业实验IV临床生物化学检验部分宅欣哗弧残叮嗅扔哟人墅靶馏庇拯硬入夜挥煞埔橙砾载莹黑词消淳忧辩博牲愧新沽婆赢迂诚炙蜀毯潮尊饵啥讽慢鲜捧我氧变呸逞蛊伦炒久臃镑泛汤法缩陷枝爽邦该闪休透羡谈壬平羽街搞磐直套僚狱吩笛柔凑乃浦臼幻尺凤纤妊询拒园心替波互顺烷辩尔从粤瞄甫

4、锋哲耸纪陕杀眼砍长铸常莉掘诧妥圣掇瓶掇靖庸滇袋次点禾卸织溅喉客挺素安拨比输达愉文沃耍即国饲砖吭仪抹耙主扩署熄船黑霍差襄臀溅幂产爆裔柬潭里蒂就腊兄蹬舷盲呻揭拂陵颁羞干兴缨玫瞬竞膊锅泥涤蕊惨鲁毕烂寝淑张吴缅盎舅璃隆诵焕坪蹦亢走饼芯倾强桂鹅啡睦觅雌庭婿撤称酥拔屉踏楼忆颅物酵懂毋蚤蹲铸鄂嘎却冗自动生化分析仪实际K值测定实际K值:理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度,尤其是ε的影响。ε在波长和温度等不同时有所不同,故有必要获得用户所用分析仪的实际ε,再计算K值,此为~。一、340nm波长实际K值测定【实验原理

5、】:通过有NAD+(NADP+)参与的反应途径,用NADH或NADPH标准液来校正仪器。用己糖激酶(HK)方法测定葡萄糖时,葡萄糖的消耗与NADH的生成呈等摩尔关系。葡萄糖有标准纯品,当反应达到终点时,NADH的摩尔数等于标准的葡萄糖摩尔数。在需要校正的仪器上测其A即可求得实际摩尔吸光系数,计算出实际K值。【注意事项】1.减少偶然误差重复测定10次,当CV>5%时,则重新测定10次。2.减少系统误差使用实际K值计算酶活性。3.如果实际ε值与理论ε值偏差过大,需对仪器检修和校正。二、405nm波长实际K值测定【实验

6、原理】:许多酶活性测定时,以人工“色素原”为底物,经酶作用后可释放出在405nm波长具有吸收峰有色的反应产物,如对硝基苯酚(4-NP)、对硝基苯胺(4-NA)、对硝基-5-氨基苯甲酸(ANBA)。他们在405nm波长时的理论ε分别为18700、9870、9490。可使用其相应的纯标准品在需要校正的仪器上测其A即可求得实际ε,计算出实际K值。以ALP实验(产物为4-NP)为例测定实际K值。【注意事项】1.4-NP标准品纯度要求较高,必要时需纯化。2.其他注意事项参见340nmK值校正。三、如何校正K值在理论K值或实

7、际K值得情况下,测定某标准品的含量,若测得的结果偏低,则需要把测得的结果调整至原标准品的含量,此时调整的数值称为校正因子,则校正K值=理论(实际)K值×校正因子=理论(实际)K值×校准值÷实测值NADH正负向反应测定酶活性一、血清乳酸脱氢酶测定LD催化反应式为:L-乳酸+NAD+(LD)→丙酮酸+NADH+H+在反应过程中,乳酸被氧化生成丙酮酸,同时NAD+还原为NADH。因NADH在340nm处有吸收峰,反应会引起340nm吸光度的增高。吸光度增加的速率与样本中LD活性呈正比关系。NADH正向反应的最适pH偏碱

8、性,可使反应平衡偏向产生丙酮酸的方向。【参考范围】成人血清LD:109U/L~245U/L【临床意义】1.LD活性增高:目前临床测定LD活性常用于心肌梗塞、肝病和恶性肿瘤的辅助诊断。2.LD活性降低:目前没有发现重要的临床意义。3.LD的特异性差,几乎存在各种组织中,如:心、肺、肾、肝、骨骼肌以及恶心肿瘤等疾患时均致此酶增高。【注意事项】1.LD活性测定可用抗凝血浆,肝素

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