骨髓细胞学检查

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1、娄底市第三人民医院检验科操作文件文件编号:XYS-CZ-04生效日期:2012年6月1日责任部门:血液病实验室页码:第页共8页骨髓细胞学检查骨髓细胞学检查应抽取骨髓少量制成薄片。采用骨髓小粒丰富、制片厚薄均匀的涂片，经瑞氏—姬姆萨混合染色后，于显微镜下检查细胞质和量的变化。[试剂]1)瑞氏染色液：瑞氏染粉18，置洁净干操的研钵内，加甘油3.5ml，研磨片刻，使瑞氏染粉充分溶解，加甲醇约50ml，继续研磨片刻后，收集上层染液；残余部分再加甲醇50ml研磨：再收集上层染液，重复几次后，用甲醇冲洗研钵，倒入同一瓶内，最后加甲醇至5

2、00mi。开始几周应经常振摇染色液。染色液存放的时间越长，染色效果也越佳。此外，研磨时染粉内应先加甘油，、以免染粉在研磨过程中结成块，更易溶解。染粉未经研磨配成的染液不宜用作骨髓片染色。2)姬姆萨浓缩染液：将姬姆萨染粉3．8g放入纯甘油250ml中，置60℃水浴2小时，溶解后力口60℃预热的甲醇250m1混匀，于室温、棕色瓶内保存，配后数天即可使用，可长期保存。3)pH6．5磷酸盐缓冲液：磷酸二氢钾1．5g，磷酸氢二钠1．0g、加蒸馏水到5000ml。最后纠正pH6．5。4)姬姆萨稀释液：取姬姆萨溶液50m1，加pH6．5磷

3、酸盐缓冲液到500ml，混匀。此液为姬姆萨应用液，可直接作涂片复染用。作瑞氏稀释液时，取此液10一20mL加蒸馏水至100ml，混匀即可。[操作]1．骨髓取材：取材部位有胸骨、棘突、髂骨前嵴或后嵴等。两岁以内小孩最好用胫骨，成人常取髂后上棘，此部位穿刺方便，病人也易接受．穿刺前要求严格消毒，杜绝细菌感染，除穿刺室紫外线消毒和皮肤消毒外，还应注意穿刺包和手套消毒时间有否过期。戴手套要熟练，避免手套接触来消毒物品。穿刺针进入髓腔时常有脱空感，吸取前针筒内应留有1m1左右的空隙，否则髓液很快进入针筒空隙而无法取出。针筒内若有水份也

4、要用消毒纱布擦干，以免溶解细胞。吸液量一般控制在0．2m1左右。因吸量过多，易被外周血稀释。部分病人干抽或吸出量太少时，不要将针头立即拔出，可边抽边调节针头深浅，或边抽边缓慢外移针头，最后将针头内可能残留的髓液尽量推出、制片，以减少病人痛苦。2．涂片：选两块小粒较多、厚薄均匀的骨髓片，自然干燥后在较厚的头端髓膜上写上病人姓名、日期及“BM”标记。加瑞氏染色液8—12滴，用吸球吹吸并使其布满整张涂片，约半分钟后，加姬姆萨稀释液5-10滴，再用吸编写：谢平制定日期：2011.12.1审核：伍海波核准：周可成修订日期：2012.6

5、.1娄底市第三人民医院检验科操作文件文件编号:XYS-CZ-04生效日期:2012年6月1日责任部门:血液病实验室页码:第页共8页球吹吸气，使两液充分混匀，若有金黄色油膜出现，染色效果更佳。染色时间一般为10一20分钟，夏天可缩短些、冬天则可延长些。冲洗时应乎放玻片让流水缓慢冲洗。另外，因手拿玻片处可能会有染料残留，应更换手拿位置再予冲洗。染色太淡的涂片，可用姬姆萨稀释液复染3分钟；着色太深时，可用瑞氏染液滴加于涂片上。立即冲洗即可。各实验室最好能摸索出自己的染色经验，尽量做到一次性染色成功。没有姬姆萨染液的单位，可用蒸馏水

6、加少量天青(或美蓝)代替，但染色效果没有前者好。染好的涂片要自然干燥，切忌加热烘干，否则细胞退色而影响观察。1．染色选两块小粒较多、厚薄均匀的骨髓片，自然干燥后在较厚的头端髓膜上写上病人姓名、日期及“BM”标记。加瑞氏染色液8—12滴，用吸球吹吸并使其布满整张涂片，约半分钟后，加姬姆萨稀释液5-10滴，再用吸球吹吸气，使两液充分混匀，若有金黄色油膜出现，染色效果更佳。染色时间一般为10一20分钟，夏天可缩短些、冬天则可延长些。冲洗时应乎放玻片让流水缓慢冲洗。另外，因手拿玻片处可能会有染料残留，应更换手拿位置再予冲洗。染色太淡

7、的涂片，可用姬姆萨稀释液复染3分钟；着色太深时，可用瑞氏染液滴加于涂片上。立即冲洗即可。各实验室最好能摸索出自己的染色经验，尽量做到一次性染色成功。没有姬姆萨染液的单位，可用蒸馏水加少量天青(或美蓝)代替，但染色效果没有前者好。染好的涂片要自然干燥，切忌加热烘干，否则细胞退色而影响观察。[分析要点](1)骨髓片观察的内容:1)肉眼观察涂片有无骨髓小粒、脂肪滴制片、染色是否良好。2)低倍镜下观察骨髓增生情况(主要分为5级)，标本有否稀释，并计数全片的巨核细胞，了解有无特殊异常细胞。3)高倍镜下观察巨核细胞形态及巨核细胞分类计数

8、(一般被分类的巨核细胞应不少于25个)，并进一步观察低倍镜下看到的可疑细胞。4)油镜下明确在低、高倍镜发现的异常或可疑细胞的性质，并作骨髓细胞分类和全面的细胞形态分析。骨髓细胞分类计数的正常范围较难制定。因为分析骨髓像是以骨髓细胞变化为基础，并结合临床表现和血像的综合性分析，不能只以单一的